談血小板-t細(xì)胞活化抗原1

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1、談血小板/T細(xì)胞活化抗原1　1985年Burns等以活化T細(xì)胞為免疫原制備了抗活化T細(xì)胞表面抗原的單克隆抗體，并將其中1株單克隆抗體Leo-A1識(shí)別的抗原命名為人T細(xì)胞系特異性活化抗原1（Tlineage-specificactivationantigen1,TLiSA1），實(shí)驗(yàn)證實(shí)TLiSA1參和了CTL細(xì)胞的活化和分化〔1-3〕。隨后的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TLiSA1也高表達(dá)于血小板表面，并和血小板的活化和凝集功能有關(guān)，遂將此抗原重新命名為血小板/T細(xì)胞活化抗原1（plateletandTcellactivationanti

2、gen1,PTA1）〔4〕。1997年我實(shí)驗(yàn)室和澳大利亞Neolecular-1,DNAM-1）序列相同。DNAM-1分子的發(fā)現(xiàn)過(guò)程同PTA1十分相似，最初作者制備針對(duì)人CTL的單抗，發(fā)現(xiàn)其中DX11單抗能明顯抑制CTL對(duì)多種腫瘤細(xì)胞系(如Colo205、PA-1、MCF7等)的殺傷功能。Shibuya等首先從外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中通過(guò)DX11單抗親和層析純化了DX11識(shí)別的抗原，進(jìn)行了部分蛋白序列測(cè)定，以多肽對(duì)應(yīng)的PCR引物擴(kuò)增出DNAM-1的部分片段，再以32P標(biāo)記的探針進(jìn)行篩選，最終獲得了DNAM-1的

3、cDNA序列。Shibuya認(rèn)為DNAM-1分子是一種新的粘附分子，并可能和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)〔6〕?！　〉侥壳盀橹梗琍TA1的配體（PTA1ligand,PTA1L）尚未基因克隆成功。本實(shí)驗(yàn)室已成功構(gòu)建、表達(dá)了PTA1胞膜外區(qū)/IgG1Fc段融合蛋白，通過(guò)PTA1/Ig融合蛋白進(jìn)行的免疫組化及粘附阻斷實(shí)驗(yàn)證實(shí)PTA1配體表達(dá)于腫瘤細(xì)胞系Colo205細(xì)胞膜表面。PTA1配體的鑒定正在進(jìn)行之中?！　TA1的基因及結(jié)構(gòu)　　1997年Sherrington等從以pCDM8為載體的活化Jurkat細(xì)胞cDNA文庫(kù)中，通過(guò)Leo

4、-A1單抗panning的方法篩選得到人PTA1陽(yáng)性克隆〔5〕。人PTA1基因?yàn)閱慰截惢?，定位于染色體18q22-q23。其cDNA全長(zhǎng)1.4kb，5?和3?端分別有174bp和111bp非編碼區(qū)。開(kāi)放讀框1　011bp，編碼336個(gè)氨基酸，包括18個(gè)疏水氨基酸的信號(hào)肽，成熟蛋白由318個(gè)氨基酸組成，屬I型跨膜糖蛋白。胞膜外區(qū)由232個(gè)氨基酸組成，形成2個(gè)免疫球蛋白超家族V樣結(jié)構(gòu)域，這種結(jié)構(gòu)在免疫球蛋白超家族成員中是唯一的一個(gè)。PTA1分子第19和90位的保守半胱氨酸形成鏈內(nèi)二硫鍵，第134和204位的保守半胱氨酸

5、形成第二個(gè)鏈內(nèi)二硫鍵，這2個(gè)二硫鍵分別起到穩(wěn)定胞膜外區(qū)2個(gè)結(jié)構(gòu)域的功能。在90位和204位半胱氨酸處均存在免疫球蛋白超家族V樣結(jié)構(gòu)域的特征性基序Asp-X（Gly或Ala）-X-Try-X-Cys基序。PTA1胞膜外區(qū)含有8個(gè)潛在的N-糖基化位點(diǎn)和3個(gè)潛在的O-糖基化位點(diǎn)。當(dāng)用內(nèi)切糖苷酶（EndoF）消化N-連接的糖基后，PTA1的相對(duì)分子質(zhì)量減小了30103，表明PTA1分子胞膜外區(qū)是高度糖基化的，這可能和PTA1參和分子識(shí)別有關(guān)。PTA1的糖基中含有大量的唾液酸，神經(jīng)氨酸酶（neuraminidase）消化唾液酸

6、后，其pI由3.5～4.2轉(zhuǎn)變?yōu)?.8～8.2。PTA1穿膜區(qū)由25個(gè)疏水氨基酸組成。胞漿區(qū)有61個(gè)氨基酸，含有3個(gè)酪氨酸、6個(gè)絲氨酸和6個(gè)蘇氨酸，胞漿區(qū)尾部含有一段EDIYVNY基序，中心酪氨酸的氨基端有2個(gè)帶負(fù)電荷的谷氨酸和天冬氨酸（ED），羧基端為纈氨酸、天冬酰胺和酪氨酸（VNY），此基序可作為非受體型蛋白酪氨酸激酶（proteintyrosinekinase,PTK）的底物。并可以和蛋白酪氨酸磷酸酶2（proteintyrosinephosphatase2,PTP2）氨基端的SH2結(jié)構(gòu)域結(jié)合。另外，在PTA1

7、胞漿區(qū)還存在著酪蛋白激酶Ⅱ（caseinkinaseⅡ）和PKC功能的底物S/T結(jié)構(gòu)。胞漿區(qū)的上述結(jié)構(gòu)和基序提示PTA1分子可能參和T細(xì)胞和血小板活化的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程〔4，5〕。人、猿、猴PTA1分子cDNA及蛋白水平的同源性為93%～95%，表明PTA1在生物進(jìn)化過(guò)程中高度保守并可能具有重要的功能?！　urns等通過(guò)Leo-A1單抗親和層析的方法從血小板上純化了PTA1分子，并進(jìn)行了蛋白部分序列測(cè)定，證實(shí)PTA1分子為一全新的分子。通過(guò)純化的PTA1分子再次免疫制備了抗PTA1的單克隆抗體NEA刺激的Jurkat細(xì)

8、胞膜表面，并且平均熒光強(qiáng)度相同，但NEA刺激的Jurkat細(xì)胞膜表面著色，當(dāng)增加Jurkat細(xì)胞膜通透性后，NEA刺激的Jurkat細(xì)胞及血小板胞膜，再用磷酸肌醇磷脂酶C（phosphatidylinositolphospholipaseC）處理細(xì)胞，然后在Jurkat細(xì)胞上清中可以檢測(cè)到從細(xì)胞膜上釋放的PTA1抗原，表明PTA1分子至少是部分