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1、萬方數(shù)據(jù)浙江理工大學碩士學位論文大量擴增特異性活化T細胞的方法研究曲弘理≯大學碩士學位論文大量擴增抗原特異性活化T細胞的方法研究作者姓名鄭竹影學科I專業(yè))生物化學與分子生物學指導老師錢其軍教授所在學院生命科學學院提交日期2014年3月中國杭州萬方數(shù)據(jù)浙江理工大學碩士學位論文大量擴增特異性活化T細胞的方法研究ZHEJIANGSCI-TECHUNIVERSfTYMASTERDISSERTATIONTheresearchofalargeamplificationmethodforspecificactivated
2、TcellsDr．QijunQianProfessorCoHegeofLifeSciences，ZhejiangSci-TechUniversityMar．2014HANGZHOU．CHINA萬方數(shù)據(jù)浙江理工大學碩士學位論文大量擴增特異性活化T細胞的方法研究分類號；UDC：論文答辯日期2014．3．10密級：答辯委員會席金潔論文評閱人金華君鄢和新蘇長青答辯委員會員錢文斌金華君解純剛張世馥萬方數(shù)據(jù)浙江理工大學碩士學位論文大量擴增特異性活化T細胞的方法研究浙江理工大學學位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是
3、本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他入已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得浙江理工大學或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作者簽名：串氣影簽字日期：為嘩年，月f_日萬方數(shù)據(jù)浙江理工大學碩士學位論文大量擴增特異性活化T細胞的方法研，學位論文版權使用授權書Y2700IIIIIlllIIIIIIIIIH314llllllOIIIll本學位論文作者完全了解
4、漸江理工大學有權保留并向國家有關部門或機構送交本論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權燙塑基墾達堂可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。(保密的學位論文在解密后適用本授權書)學位論文作者簽名：躺觳簽字日期：j!刀『年年弓月f2，Et導師簽名：戤分簽字日期：矽腳年弓月f易曰萬方數(shù)據(jù)浙江理工大學碩士學位論文大量擴增特異性活化T細胞的方法研究中文摘要癌癥的高發(fā)率和年輕化的趨勢已經(jīng)越來越威脅到人類的健康。目前，已有的治療方法包括
5、：外科手術切除法，放療，化療等等。但是目前這些方法都不能完全治愈癌癥，然而，過繼性免疫細胞治療為癌癥的治療帶來了新的希望。與傳統(tǒng)的腫瘤治療方法不同，大多數(shù)免疫治療在消除腫瘤的過程中顯示出重要的作用，而且可以通過誘導免疫記憶來建立腫瘤與機體之間新的平衡，從根本上治愈腫瘤。免疫細胞治療技術與其他抗腫瘤策略如手術、放化療的聯(lián)合應用已經(jīng)證實優(yōu)于單一的治療方案，極大拓寬了細胞免疫治療。過繼性免疫細胞治療是指通過輸入自身或同種異體的腫瘤殺傷細胞來治療腫瘤的方法。它不僅可以糾正細胞免疫功能的低下，促進宿主抗腫瘤免疫的功能
6、，還可以直接發(fā)揮抗腫瘤的作用。其中細胞毒性T細胞的過繼治療有著特殊的優(yōu)越性。細胞毒性T細胞的過繼治療是實體腫瘤，尤其是腫瘤相關抗原比較明確的惡性黑色素瘤、結直腸癌、肝癌、前列腺癌、肺癌等的研究熱點。特異性CTLs(細胞毒性T細胞)的產(chǎn)生是通過將腫瘤抗原負載成熟的DC(樹突狀細胞)刺激T細胞從而獲得單一抗原的特異性CTLs克隆。這種CTL能識別并殺傷攜帶相應腫瘤抗原的惡性細胞，經(jīng)過大量的擴增就能應用于臨床治療。這種治療方法相比其他的治療方法具有易獲得、可操作性強，靶向性好，安全性高等特點。但是，過繼性T細胞轉(zhuǎn)
7、移還面臨很多的問題：DC的成熟程度低，免疫耐受，特異性活化T細胞的數(shù)量不足等等。由于DC擴增具有很大的難度，所以這也間接限制了特異性活化T細胞的數(shù)量。本文主要通過以下三個步驟建立擴增抗原特異性T細胞的方法：(1)用Ficoll密度梯度離心的方法從癌癥病人外周血中分離單核細胞后貼壁培養(yǎng)并將懸浮的T淋巴細胞凍存以備后續(xù)試驗之用。培養(yǎng)單核細胞時加入細胞因子FLT3L，GM—CSF，IL一4誘導分化，在培養(yǎng)第6天以MOI值為5加入Ad5一MUP53負載抗原。最后加入細胞因子TNF—a，LPS，PGE一2誘導DC成熟
8、。(2)將培養(yǎng)成熟的DC與相同人的初始T細胞以1：10的比例共培養(yǎng)。在之后的萬方數(shù)據(jù)浙江理工大學碩士學位論文大量擴增特異性活化T細胞的方法研究培養(yǎng)中連續(xù)加入DC刺激T細胞形成抗原特異性的活化T細胞。培養(yǎng)細胞過程中每兩天加入IL-2，IL-7，IL一15促進細胞的生長。(3)將共培養(yǎng)后的T細胞轉(zhuǎn)入包被了CD3，C1)28抗體的小培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，并進行大量擴增。培養(yǎng)細胞過程中每兩天加入IL一2，IL一7，IL一15促進
