血小板-t細(xì)胞活化抗原1

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1、血小板/T細(xì)胞活化抗原1　　有趣的是，PTA1的基因序列與1996年DNAX分子與細(xì)胞生物學(xué)研究院Shibuya等發(fā)表的DNAM-1分子（DNAXaccessorymolecular-1,DNAM-1）序列相同。DNAM-1分子的發(fā)現(xiàn)過程同PTA1十分相似，最初制備針對人CTL的單抗，發(fā)現(xiàn)其中DX11單抗能明顯抑制CTL對多種腫瘤細(xì)胞系(如Colo205、PA-1、MCF7等)的殺傷作用。Shibuya等首先從外周血單個核細(xì)胞(PBMC)中通過DX11單抗親和層析純化了DX11識別的抗原，進(jìn)行了部分蛋白序列測定，以多肽對應(yīng)的PCR引物擴(kuò)增出DNAM-1的部分片段

2、，再以32P標(biāo)記的探針進(jìn)行篩選，最終獲得了DNAM-1的cDNA序列。Shibuya認(rèn)為DNAM-1分子是一種新的粘附分子，并可能與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)〔6〕。　　到目前為止，PTA1的配體（PTA1ligand,PTA1L）尚未基因克隆成功。本實驗室已成功構(gòu)建、表達(dá)了PTA1胞膜外區(qū)/IgG1Fc段融合蛋白，通過PTA1/Ig融合蛋白進(jìn)行的免疫組化及粘附阻斷實驗證實PTA1配體表達(dá)于腫瘤細(xì)胞系Colo205細(xì)胞膜表面。PTA1配體的鑒定正在進(jìn)行之中。　　PTA1的基因及結(jié)構(gòu)　　1997年Sherrington等從以pCDM8為載體的活化Jurkat細(xì)胞cDNA文庫中，

3、通過Leo-A1單抗panning的方法篩選得到人PTA1陽性克隆〔5〕。人PTA1基因為單拷貝基因，定位于染色體18q22-q23。其cDNA全長1.4kb，5和3端分別有174bp和111bp非編碼區(qū)。開放讀框1　011bp，編碼336個氨基酸，包括18個疏水氨基酸的信號肽，成熟蛋白由318個氨基酸組成，屬I型跨膜糖蛋白。胞膜外區(qū)由232個氨基酸組成，形成2個免疫球蛋白超家族V樣結(jié)構(gòu)域，這種結(jié)構(gòu)在免疫球蛋白超家族成員中是唯一的一個。PTA1分子第19和90位的保守半胱氨酸形成鏈內(nèi)二硫鍵，第134和204位的保守半胱氨酸形成第二個鏈內(nèi)二硫鍵，這2個二硫鍵分

4、別起到穩(wěn)定胞膜外區(qū)2個結(jié)構(gòu)域的作用。在90位和204位半胱氨酸處均存在免疫球蛋白超家族V樣結(jié)構(gòu)域的特征性基序Asp-X（Gly或Ala）-X-Try-X-Cys基序。PTA1胞膜外區(qū)含有8個潛在的N-糖基化位點和3個潛在的O-糖基化位點。當(dāng)用內(nèi)切糖苷酶（EndoF）消化N-連接的糖基后，PTA1的相對分子質(zhì)量減小了30×103，表明PTA1分子胞膜外區(qū)是高度糖基化的，這可能與PTA1參與分子識別有關(guān)。PTA1的糖基中含有大量的唾液酸，神經(jīng)氨酸酶（neuraminidase）消化唾液酸后，其pI由3.5～4.2轉(zhuǎn)變?yōu)?.8～8.2。PTA1穿膜區(qū)由25個疏水氨基酸

5、組成。胞漿區(qū)有61個氨基酸，含有3個酪氨酸、6個絲氨酸和6個蘇氨酸，胞漿區(qū)尾部含有一段EDIYVNY基序，中央酪氨酸的氨基端有2個帶負(fù)電荷的谷氨酸和天冬氨酸（ED），羧基端為纈氨酸、天冬酰胺和酪氨酸（VNY），此基序可作為非受體型蛋白酪氨酸激酶（proteintyrosinekinase,PTK）的底物。并可以和蛋白酪氨酸磷酸酶2（proteintyrosinephosphatase2,PTP2）氨基端的SH2結(jié)構(gòu)域結(jié)合。另外，在PTA1胞漿區(qū)還存在著酪蛋白激酶Ⅱ（caseinkinaseⅡ）和PKC作用的底物S/T結(jié)構(gòu)。胞漿區(qū)的上述結(jié)構(gòu)和基序提示PTA1分子可

6、能參與T細(xì)胞和血小板活化的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程〔4，5〕。人、猿、猴PTA1分子cDNA及蛋白水平的同源性為93%～95%，表明PTA1在生物進(jìn)化過程中高度保守并可能具有重要的功能?！　urns等通過Leo-A1單抗親和層析的方法從血小板上純化了PTA1分子，并進(jìn)行了蛋白部分序列測定，證實PTA1分子為一全新的分子。通過純化的PTA1分子再次免疫制備了抗PTA1的單克隆抗體NEA刺激的Jurkat細(xì)胞膜表面，并且平均熒光強(qiáng)度相同，但NEA刺激的Jurkat細(xì)胞膜表面著色，當(dāng)增加Jurkat細(xì)胞膜通透性后，NEA刺激的Jurkat細(xì)胞及血小板胞膜，再用磷酸肌醇磷脂酶C（

7、phosphatidylinositolphospholipaseC）處理細(xì)胞，然后在Jurkat細(xì)胞上清中可以檢測到從細(xì)胞膜上釋放的PTA1抗原，表明PTA1分子至少是部分通過糖基磷脂酰肌醇（glycosylphosphatidylinositol,GPI）方式錨定于細(xì)胞膜上的。其它參與細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的膜表面分子中，有部分是通過GPI方式錨定于細(xì)胞膜表面的。而在血小板上清中未發(fā)現(xiàn)PTA1抗原的釋放，可能血小板PTA1分子主要以跨膜方式連接于血小板胞膜上，另一種可能是血小板胞膜對外源性酶的作用不敏感?！　TA1的表達(dá)及表達(dá)調(diào)節(jié)　　已獲得的實驗證據(jù)表明，PTA1主

8、要表達(dá)于巨核/血小板譜系