黃芪甲苷含量測定方法研究進展

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1、黃芪甲苷含量測定方法研究進展　　【摘要】綜述了黃芪甲苷含量測定方法的研究進展，包括薄層掃描法、高效液相色譜法、超高效液相色譜法等，評述每種方法的特點，為黃芪甲苷的含量測定提供參考?！　　娟P鍵詞】黃芪甲苷；含量測定；研究進展　　黃芪甲苷為黃芪的主要活性成分之一，生物活性強，具有增強機體免疫力、提高機體的抗病能力、抗病毒、抗應激功效、促生長、改善心肺功能的作用。目前主要采用黃芪甲苷作為評價黃芪藥材及其制劑質(zhì)量優(yōu)劣的標準。本文概述黃芪甲苷的含量測定方法?！　?.薄層掃描法（TLCS）　　薄層掃描法分為單波長和雙波長測定。雙波長掃描減少了干擾因素

2、，提高了靈敏度，采用較多。此法設備簡單，操作方便、快速，應用廣泛，被2000版《中國藥典》采用為黃芪甲苷含量的測定方法。薄層掃描法的薄層板多采用硅膠G，展開劑多采用氯仿-甲醇-水（65：35：10），顯色劑一般為10%硫酸乙醇。翟旭峰等[1]在實驗中發(fā)現(xiàn)，以正丁醇-醋酸乙酯-稀氨水（4：1：5）為比例的上層溶液為展開劑，可使黃芪甲苷的斑點分離效果較好?！　?.高效液相色譜法（HPLC）　　高效液相色譜兼有分離和分析功能，具有高分離效率、高靈敏度、測定快速等優(yōu)點，并且該方法避免了預處理的繁雜步驟，因此在中藥含量測定中應用廣泛?！　?.1UV

3、檢測器　　UV檢測器為最常用的檢測器，分為紫外吸收檢測器和光電二極管陣列檢測。黃芪甲苷在200.18nm處為最大吸收波長，為紫外末端吸收，通常測定波長多選用201～203nm。色譜柱主要是C18，流動相一般為乙腈-水，流速多為1mL/min。翟海云等[2]采用該法測定了復方補氣養(yǎng)血口服液中黃芪甲苷的含量，方法簡便可行、重復性好?！　?.2RI檢測器　　RI檢測法簡單方便、重現(xiàn)性好，但是檢測靈敏度不高，被用于黃芪甲苷含量測定并不廣泛?！　?.3ELSD檢測器　　蒸發(fā)光散射檢測器具有靈敏度高、適用性廣、干擾因素少等優(yōu)點，特別適合于黃芪甲苷這種

4、紫外末端吸收，沒有特征吸收波長的情況，故被2005版和2010版《中國藥典》采用為的黃芪甲苷含量的測定方法。該法通常采用C18色譜柱，柱溫一般不超過40℃，流動相為乙腈-水或甲醇-水，流速一般不超過1mL/min。孫東東等[3]采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法對糖尿平膠囊中的黃芪甲苷進行了含量測定，色譜柱為KromasilC18（4.6×250mm，5μm），柱溫：30℃，流動相為甲醇-水（76：24），流速為1mL/min，ELSD漂移管溫度100℃，氣體流量為2.24SLPM；黃芪甲苷在2.51～7.53μg范圍內(nèi)呈良好的線性關系，

5、回收率達到101.80%，RSD=1.57%；該方法準確度高，重現(xiàn)性好，簡便快捷?！　?.4MS檢測器　　質(zhì)譜分析具有靈敏度高、選擇性強、進樣量少、準確性好等特點。高效液相色譜和質(zhì)譜儀聯(lián)用可以定性、定量的分析復雜成分樣品和微量物質(zhì)，為體內(nèi)中黃芪甲苷和復雜樣品中黃芪甲苷的含量測定提供了方法。　　HPLC-MS法多采用C18色譜柱，柱溫多選用室溫，流動相多為乙腈-水，梯度洗脫，流速一般不超過1mL/min。多采用電噴霧離子化（ESI）方式，選擇性離子監(jiān)測（SIM），檢測模式有正離子和負離子兩種。李晶等[4]應用HPLC-ESI-MSn法測定了

6、黃芪藥材中黃芪甲苷的含量。色譜條件：色譜柱為AgilentSB-C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相為甲醇-0.2%甲酸水（70：30，v：v）；體積流量為0.7mL/min；檢測波長為203nm；柱后2：1分流，三分之一流出液進行質(zhì)譜分析。質(zhì)譜條件：電噴霧正離子模式檢測；霧化氣壓力為35.0psi；干燥氣溫度為350℃，流速為8.0L/min；黃芪甲苷選擇離子對為m/z807.4→627.2；質(zhì)量掃描范圍為100～1000amu。結果表明黃芪甲苷在0.10～1.04mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關系，平均加樣回收率為96.5

7、1%。該方法具有簡便，快速和靈敏度高的特點，可用于黃芪藥材及其生物制品樣品中黃芪甲苷測定?！　?.比色法　　比色法是通過黃芪甲苷與顯色劑發(fā)生顯色反應后生成有色的物質(zhì)，再用分光光度計測定的方法，實際應用較少。根據(jù)顯色劑種類分為香草醛-冰醋酸比色法和香草醛-硫酸比色法?！　?.熒光法　　熒光法是利用黃芪甲苷與某些試劑反應生成在紫外光照射后能發(fā)射熒光的物質(zhì)的特性而定量分析的方法。此方法應用較少，根據(jù)試劑的種類分為香草醛-磷酸體系熒光法和茴香酸-硫酸體系熒光法?！　?.超高效液相色譜（UPLC）　　超高效液相色譜法是一個新興的領域，通過減小固定相

8、的粒度，使色譜分離的解析度達到新的高度。超高效液相色譜具有高分離度、高速度和高靈敏度等優(yōu)點。因其分析精度高為一些需要深入研究領域提供了很好的方法。楊俊等[5]采用UPLC-ELSD法測定黃芪中