hplc法測定黃芪葉中黃芪甲苷的含量論文

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1、HPLC法測定黃芪葉中黃芪甲苷的含量論文【摘要】目的建立一種準(zhǔn)確、簡便測定黃芪甲苷含量的分析方法。方法色譜柱為NucleosilC18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相為乙腈-水＝1∶2；流速為0.8ml/min；檢測波長為205nm；速度為0.4mm/min。靈敏度為0.1AUFS,測定了黃芪甲苷的含量，平均回收率為96.1%，RSD為2.15%。結(jié)果樣品濃度在0.01～0.2mg/ml之間與峰面積成良好的線性關(guān)系。結(jié)論本方法的重復(fù)性好、精密度高、穩(wěn)定性強?！娟P(guān)鍵詞】HPLC黃芪葉黃芪葉中黃芪甲苷【Abstract】0bjective:Establishesonekindaccur

2、ately,easilytodetermineAstragalosidethecontenttheanalysismethod.Method:ThechromatographiccolumnisNucleosiltheC18column(4.6mm×250mm,5μm);Floethylcyanide-l/min;Theexamination;Thespeedis0.4mm/min.Thesensitivityis0.1AUFS,hasdeterminedtheAstragalosidecontent.Theaveragereturns-ratiois96.1%,RSDis2.15%.Resu

3、lt:Sampledensityin0.01～0.2mg/mlbeesthegoodlinearrelationshipethod'sduplicationisgood,accuracyhigh,stable.【Keyg/ml之間與峰面積呈線性，該法靈敏度高，重現(xiàn)性好，可準(zhǔn)確地測定黃芪甲苷的含量。1儀器與試劑×250mm，5μm);流動相為乙腈-水＝1∶2；流速為0.8ml/min；檢測波長為205nm；速度為0.4mm/min。2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線制作精密稱取黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品2.128mg，加流動相定容至2ml，配制成1.064mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別以10、20、30、40、50μl進樣測定，

4、以峰面積對進樣量作線性回歸，得回歸方程為Y＝－5.6×10-5＋6.9365×10-4X(Y為峰面積，X為黃芪甲苷量)，r＝0.9994，黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品在10.64～53.20μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。2.3提取方法的選擇用3種不同提取方法(索氏提取器提取1h；80℃溫浸提取1h和超聲波提取1h)提取樣品，后2種提取方法測得黃氏甲苷含量略低，故選索氏提取器提取方法。2.4流動相的選擇實驗試用多種溶劑系統(tǒng)，最后確定以乙腈-水＝1∶2為流動相，黃芪甲苷分離效果最好，保留時間也較適宜。色譜圖見上圖2(ABC)。2.5樣品液制備將黃芪葉陰干后研成粉過40目篩，然后精密稱取5.00g，放置索氏提

5、取器中，用100ml80%甲醇加熱提取2h，提取液減壓蒸去甲醇，用20ml正丁醇分別萃取3次，合并正丁醇萃取部分，減壓蒸干，殘渣用重蒸甲醇定容至2ml，用0.45μ微孔濾膜過濾，濾液用于HPLC分析，每次進樣10μl。2.6加樣回收率試驗稱取黃芪葉粉5.00g5份，分別精密加入黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品2.00mg，按樣品制備方法提取樣品并進行定量分析，將測定結(jié)果扣除樣品中黃芪甲苷含量，與加入標(biāo)準(zhǔn)品的比為加樣回收率。結(jié)果為96.1%(n＝5),RSD%=2.15(n=5)。2.7精密度試驗取同一樣品液，重復(fù)進樣5次，根據(jù)測得的樣品中黃芪甲苷的濃度(μg/ml)計算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.40%。又取同一樣品5

6、份，制備5份樣品液，分別進樣測出黃芪甲苷的濃度，計算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.20%。2.8穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，每隔2h進樣1次，分別測定其色譜峰面積。RSD%=2.2(n=5)，結(jié)果表明，譜峰面積在8h內(nèi)基本無變化，表明本實驗條件下穩(wěn)定性良好。2.9黃芪葉中黃芪甲苷的定量分析：依法測定黃芪葉中黃芪甲苷的含量3討論黃芪甲苷是黃芪的主要有效成分之一，根上部分幾乎全部落入地面，成為肥料，為了有效的利用自然資源，我們?yōu)槎糠治鳇S芪葉黃芪甲苷的含量，本實驗建立了黃芪甲苷的HPLC測定法，測得黃芪葉中黃芪甲苷的含量為4.20%(干重)，與黃芪標(biāo)準(zhǔn)含量(1.50%)相差2.70%。實驗證明：黃芪葉中黃芪

7、甲苷的含量非常高，人類應(yīng)該廣泛利用。本實驗建立的HPLC測定法加樣回收率高，精密度試驗相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小，測試數(shù)據(jù)更可靠。參考文獻1張宇,沈德鳳,楊波.黃芪葉中黃芪甲苷的含量測定J中國野生資源，2002，（05）020.2王辰,侯連兵,劉嬋.HPLC-ELSD法測定黃芪注射液中黃芪甲苷的含量(2006)06-0618.3肖佳尚,..畢業(yè)朱濤.HPLC-ELSD法測定芪紅膠囊中黃芪甲苷的含量J廣東藥學(xué)院