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《洛伐他汀合成酶調(diào)控基因love和mkh的克隆及其序列分析比較》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、洛伐他汀合成酶調(diào)控基因lovE和mkH的克隆及其序列分析比較作者：黃欣朱碧云呂帶弟陳偉立黃曉琳李浩明【摘要】目的克隆紅曲霉和土曲霉洛伐他汀合成酶調(diào)控基因lovE和mkH,并進(jìn)行序列分析和同源性比較。方法根據(jù)GeneBank土曲霉和紅曲霉洛伐他汀合成酶基因序列設(shè)計(jì)引物，以土曲霉和紅曲霉基因組DNA為模板PCR擴(kuò)增lovE和mkH基因并克隆到pMD19Tsimple載體。利用DNAMAN等軟件以及互聯(lián)網(wǎng)資源對(duì)lovE和mkH測序結(jié)果與其編碼的氨基酸序列進(jìn)行分析比對(duì)。結(jié)果分別擴(kuò)增得到1512bp和1464bp的目的片段lovE和mkH。結(jié)論lovE和mkH同源性很高，并與GeneBank中相關(guān)已知
2、序列基本相同，是洛伐他汀生物合成酶調(diào)控基因，且其表達(dá)產(chǎn)物為GAL4類轉(zhuǎn)錄因子?！娟P(guān)鍵詞】土曲霉紅曲霉洛伐他汀轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控基因洛伐他汀是膽固醇生物合成中的關(guān)鍵酶HMGCoA還原酶的競爭性抑制劑，是目前治療高血脂癥最有效的藥物之一［1-3］，它可下調(diào)炎癥相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，減緩動(dòng)脈粥樣硬化［4,5］,并可促進(jìn)惡性甲狀腺細(xì)胞凋亡［6,7］,具有抑制乳腺癌細(xì)胞增殖的功能［8］。土曲霉洛伐他汀合成酶基因簇包括lovA1ovG以及洛伐他汀合成酶調(diào)控基因lovE和mkH的克隆及其序列分析比較作者：黃欣朱碧云呂帶弟陳偉立黃曉琳李浩明【摘要】目的克隆紅曲霉和土曲霉洛伐他汀合成酶調(diào)控基因lovE和mkH,并進(jìn)行
3、序列分析和同源性比較。方法根據(jù)GeneBank土曲霉和紅曲霉洛伐他汀合成酶基因序列設(shè)計(jì)引物，以土曲霉和紅曲霉基因組DNA為模板PCR擴(kuò)增lovE和mkH基因并克隆到pMD19Tsimple載體。利用DNAMAN等軟件以及互聯(lián)網(wǎng)資源對(duì)lovE和mkH測序結(jié)果與其編碼的氨基酸序列進(jìn)行分析比對(duì)。結(jié)果分別擴(kuò)增得到1512bp和1464bp的目的片段lovE和mkH。結(jié)論lovE和mkH同源性很高，并與GeneBank中相關(guān)已知序列基本相同，是洛伐他汀生物合成酶調(diào)控基因，且其表達(dá)產(chǎn)物為GAL4類轉(zhuǎn)錄因子?！娟P(guān)鍵詞】土曲霉紅曲霉洛伐他汀轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控基因洛伐他汀是膽固醇生物合成中的關(guān)鍵酶HMGCoA還原酶
4、的競爭性抑制劑，是目前治療高血脂癥最有效的藥物之一［1-3］，它可下調(diào)炎癥相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，減緩動(dòng)脈粥樣硬化［4,5］,并可促進(jìn)惡性甲狀腺細(xì)胞凋亡［6,7］,具有抑制乳腺癌細(xì)胞增殖的功能［8］。土曲霉洛伐他汀合成酶基因簇包括lovA1ovG以及l(fā)ovl和lvrA等基因［9-11］。紅曲霉洛伐他汀合成酶基因簇包括mkAmkl等9個(gè)基因。其中l(wèi)ovE和mkH分別是土曲霉和紅曲霉洛伐他汀生物合成的調(diào)控基因，編碼GAL4類轉(zhuǎn)錄因子，其氨基酸序列中半胱氨酸富集的DNA結(jié)合區(qū)域表明含有Zn2Cys6型鋅指結(jié)構(gòu)域［12-14］。為深入研究洛伐他汀生物合成調(diào)控基因的生物學(xué)功能并利用這類轉(zhuǎn)錄因子來調(diào)控洛伐他
5、汀合成代謝，本研究首次從國內(nèi)常用工業(yè)原始出發(fā)菌株土曲霉CCTCCAF93208和紅曲霉CICC5031基因組中PCR擴(kuò)增克隆洛伐他汀合成酶調(diào)控基因，并對(duì)該基因和其編碼的蛋白產(chǎn)物進(jìn)行序列分析對(duì)比。1實(shí)驗(yàn)材料菌株和培養(yǎng)基土曲霉(Aspergillusterrus)CCTCCAF93208：中國典型培養(yǎng)物保藏中心；紅曲霉(Monascusanka)CICC5031：中國工業(yè)微生物菌種保藏中心;大腸桿菌DH5a為本實(shí)驗(yàn)室保藏;大腸桿菌LB培養(yǎng)基和LB/Amp培養(yǎng)基均按實(shí)驗(yàn)室常用培養(yǎng)基的配置方法配置。斜面培養(yǎng)基［15］(g/L)：察氏培養(yǎng)基(蔗糖30gNaN033g,K2HPO41g,MgS04?7H
6、20g，KC10.5g,FeS04?7H20g,瓊脂15g,純凈水1OOOmDo絲生長培養(yǎng)基[15](g/L)：葡萄糖5Og，酵母膏10g，番茄醬20g，CaCO31g，pH?。試劑PCR引物由英俊生物技術(shù)有限公司合成。Taq酶采用fermentas的Taqrecombinant。OMEGA的膠回收試劑盒D250101。Takara公司的pMD19Tsimple克隆載體。Takara公司的DNAMarkerDL2000和100bpladder。其他常規(guī)化學(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純。2實(shí)驗(yàn)方法培養(yǎng)方法用2mL無菌水沖洗孢子，接入固體斜面培養(yǎng)。固體斜面培養(yǎng)7d后，以5mL水洗下，稀釋至濃度為107個(gè)/
7、mL，取2mL加入100mL菌絲生長培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)速150r/min,28°。培養(yǎng)4d?；蚪MDNA提取過濾取菌絲球(盡量吸干)，稱重并轉(zhuǎn)入_20°C預(yù)冷的研缽。每克菌絲球加入3g石英砂，mL提取液[lOOmmol/LTrisHC1(),20mmol/LNa2EDTA,mol/LNaCl,1%SDS],mL有機(jī)液（酚/氯仿/異戊醇（體積比）25:24:1）。將上述混合物于預(yù)冷研缽中劇烈研磨lmin直到成黏稠狀細(xì)粉
