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《Monascusruber5031洛伐他汀合成酶基因的PCR分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、Monascusruber5031洛伐他汀合成酶基因的PCR分析【關(guān)鍵詞】洛伐他汀合成酶合成酶摘要:目的分析Monascusruber5031洛伐他汀合成酶基因的結(jié)構(gòu)。方法用3對(duì)以土曲霉洛伐他汀合成酶基因?yàn)榛A(chǔ)設(shè)計(jì)的PCR引物對(duì)紅曲霉基因組進(jìn)行了PCR分析，其中一對(duì)引物序列為，正向：5’TTCGATGCGGCCTTCTTCAAT3’和反向5’ATGGTTCGGCATCGTAATTCC3’。結(jié)果在紅曲霉基因組中相當(dāng)于土曲霉洛伐他汀合成酶基因的LNKS區(qū)域擴(kuò)增出了745bp的核酸片段，其序列與土曲霉合成酶的這一區(qū)域序列相同。結(jié)論土曲霉和紅曲霉洛伐
2、他汀合成酶基因存在同源區(qū)域。 關(guān)鍵詞:紅曲霉平；土曲霉；洛伐他汀合成酶合成酶；PCR Abstract:ObjectiveAnalysesthestructureofMonascusruber5031lovastatinbiosynthesisgenecluster.MethodsThreepairsofdegeneratePCRprimersweredesignedmatchingtheregionsoflovastatinbiosynthesisgeneclusterinAspergillusterreus,oneofthemis,5
3、’primer:TTCGATGCGGCCTTCTTCAAT,3’primer:ATGGTTCGGCATCGTAATTCC.ResultsA745bpDNAsequencewasamplifiedbyPCRfromMonascusruber5031genomicDNAandthesequenceisthesamewithAspergillusterreuslovastatinbiosynthesisgene.ConclusionThereissimilarsequencewithinthelovastatinbiosynthesisgenecl
4、usterof8AspergillusterreusandMonascusRuber. Keywords:Monascusruber；Aspergillusterreus；lovastatinbiosynthesisgenecluster;PCR紅曲霉（Monascusruber）中產(chǎn)生的莫那可林K（monacolinK）即洛伐他汀(lovastatin)，是膽固醇生物合成中的關(guān)鍵酶HMGCoA還原酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，是目前治療高血脂癥最有效的藥物之一，并且對(duì)心絞痛患者和心肌梗死患者也有一定的治療效果［1］。此外，它還可下調(diào)炎癥相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的
5、表達(dá),從而有益于治療動(dòng)脈粥樣硬化癥［2］。近期研究表明,它可促進(jìn)惡性甲狀腺細(xì)胞凋亡［3］，具有抑制乳腺癌細(xì)胞增殖的功能［4］。對(duì)參與洛伐他汀生物合成的聚酮合成酶的研究主要在土曲霉中進(jìn)行［5-7］，土曲霉也是目前工業(yè)化生產(chǎn)洛伐他汀的主要菌種。Reeves和Vederas等研究了土曲霉（Aspergillusterreus）洛伐他汀的PKS基因結(jié)構(gòu)，序列分析發(fā)現(xiàn)在克隆的64kbDNA中有18個(gè)開放讀框（ORF），經(jīng)序列對(duì)比分析確定了13個(gè)ORF的功能。其基因簇可分為洛伐他汀結(jié)構(gòu)中九酮部分的合成酶基因（即LNKS）和二酮部分的合成酶基因（即LDKS
6、），LNKS也稱為lovB，而LDKS含有的功能域有：lovC（烯酯酰還原酶）、lovD（轉(zhuǎn)脂酶）、ORF8（HMGCoA還原酶）、lovE（調(diào)節(jié)蛋白）、lovF（聚酮合成酶）、ORF13（調(diào)節(jié)蛋白）及細(xì)胞色素P450加單氧酶等。8 紅曲霉中與合成洛伐他汀相關(guān)基因的結(jié)構(gòu)的研究則較少，Chen等［8］于2005年8月發(fā)往Genebank的叢毛紅曲霉的莫那可林K合成酶基因簇是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的紅曲霉合成洛伐他汀相關(guān)酶的基因簇。由于紅曲霉中可產(chǎn)生洛伐他汀及多種有生理活性的物質(zhì)，它又是傳統(tǒng)的食品添加劑，所以通過分析研究紅曲霉中洛伐他汀合成相關(guān)基因?qū)⒂欣?/p>
7、于更好地開發(fā)利用紅曲霉。本文分別以土曲霉的LNKS基因的KS區(qū)域（位于lovB基因區(qū)域內(nèi)）、土曲LDKS基因簇中的lovC（烯酯酰還原酶功能域）及l(fā)ovE（調(diào)控蛋白功能域）基因?yàn)榘袠?biāo)設(shè)計(jì)了3對(duì)PCR引物，以這3組引物對(duì)產(chǎn)洛伐他汀的紅色紅曲霉菌的基因組DNA進(jìn)行了PCR分析?！ ?材料與方法 1.1材料 1.1.1菌株和培養(yǎng)基 紅曲菌種：中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏中心紅色紅曲霉Monascusruber5031?！ ⌒泵媾囵B(yǎng)基：取50g大米，洗凈加水800mL，煮成稀粥，冷卻到60~65℃。將150g麥芽粉摻入大米粥中攪拌均勻，放入55~60
8、℃保溫箱內(nèi)糖化4h，取出過濾。取250mL加250mL水，加2%的瓊脂，裝瓶、滅菌。菌絲生長(zhǎng)培養(yǎng)基：以上培養(yǎng)基不加瓊脂?！ ?.1.2儀器與試劑 日立高速冷凍離心
