nsclc中wwox蛋白、erbb2蛋白的表達(dá)及其與細(xì)胞增殖之間的關(guān)系

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1、NSCLC中WWOX蛋白、erbB2蛋白的表達(dá)及其與細(xì)胞增殖之間的關(guān)系：劉芳楊翠軍李華孫黎【摘要】目的探討張家口地區(qū)健康中老年人群CYP1A1基因MspⅠ的多態(tài)性。方法采用等位基因特異性擴(kuò)增和聚合酶鏈反應(yīng)限制性片段長度多態(tài)性(PCRRFLP)技術(shù)，分析了360例張家口地區(qū)健康成人的CYP1A1基因3′端限制性內(nèi)切酶MspⅠ位點(diǎn)的3種基因型的分布規(guī)律。結(jié)果對照組MspⅠ基因型TT占35.8%，基因型TC占50.2%，基因型CC占14.0%，等位基因TC分別為60.9%、39.1%;實(shí)驗(yàn)組MspⅠ基因型TT占34.0%，基因型TC占51.2%，基因型CC占14.8%，等位基因T、C分別為5

2、9.6%、40.4%。結(jié)論張家口地區(qū)健康老年人群CYP1A1基因存在MspⅠ的多態(tài)性，與健康中青年人群沒有顯著性差異?！娟P(guān)鍵詞】細(xì)胞色素P4501A1;等位基因;基因多態(tài)性;MspⅠ　CYP1A1屬細(xì)胞色素P(CYP)450超基因家族成員，是外源性和內(nèi)源性化合物在體內(nèi)代謝的重要Ⅰ相酶之一，參與多種內(nèi)外源性化學(xué)物質(zhì)的體內(nèi)代謝過程〔1〕。現(xiàn)今，已發(fā)現(xiàn)CYP1A1基因MSPⅠ多態(tài)在不同的種族、年齡、民族和地區(qū)的分布具有差異，并有報道其多態(tài)性與某些癌變的發(fā)生相關(guān)〔2〕。CYP1A1基因主要分布于肺、腎、胃腸道、皮膚、胎盤等組織中，對內(nèi)源性和外源性化合物在體內(nèi)的代謝有重要的作用，主要通過氧化、還原、

3、水解等作用，改變化合物所具有的功能基團(tuán)，或使其分解。CYP1A1主要參與多環(huán)芳烴類化合物(PAH)的代謝，把其代謝為酚類物質(zhì)活性很強(qiáng)的環(huán)氧化物，這些環(huán)氧化物在致癌、致突變中都有重要作用〔3〕。本研究采用聚合酶鏈反應(yīng)限制性片段長度多態(tài)性(PCRRFLP)的技術(shù)，探討張家口地區(qū)健康中老年人群CYP1A1基因MspⅠ多態(tài)性分布，以期為本地區(qū)癌癥的病發(fā)提供參考?！　?材料與方法　　1.1研究對象對照組隨機(jī)選擇360例無血緣關(guān)系的健康張家口地區(qū)人員，均在原籍穩(wěn)定居住2代以上，年齡18～55歲，其中男性186例，女性174例。老年組隨機(jī)選76名無血緣關(guān)系的健康張家口人：年齡60～78歲，平均年齡6

4、5歲，其中女性32例，男性44例。經(jīng)張家口河北北方學(xué)院第一附屬醫(yī)院門診查體健康，無遺傳疾病的健康人群?！　?.2標(biāo)本收集從上述人群中均抽取空腹外周靜脈全血3ml，應(yīng)用賽百盛公司的基因組DNA快速提取試劑盒提取基因組DNA?！　?.3主要試劑及儀器引物由北京紐英倫生物公司合成，限制性內(nèi)切酶MspⅠ購于北京紐英倫生物公司，德國EppendorfPCR擴(kuò)增儀，DYYIII2穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀(北京六一儀器廠)，紐英倫生物公司的基因組DNA快速提取試劑盒，BioRad凝膠成像分析儀?！　?.4CYP1A1MspⅠ位點(diǎn)基因分型采用等位基因特異性擴(kuò)增方法PCRRFLP技術(shù)為CYP1A1MspⅠ位點(diǎn)基因

5、分型。PCR的反應(yīng)條件:反應(yīng)總體積50μl，含有200μmol/LdNTP，上游引物序列為5′CAGTGAAGAGGTGTAGCCGCT3′，0.4μmol/L，下游引物序列為5′TAGGAGTCTTGTCTCATGCCT3′，0.4μmol/L，模板DNA0.4μg，1UTaqDNA聚合酶，最后加滅菌雙蒸水補(bǔ)齊至50μl。擴(kuò)增參數(shù)：97℃預(yù)變性7min，然后95℃變性50s，66℃退火50s，72℃延伸1min，30個循環(huán)后72℃繼續(xù)延伸10min。取10μlPCR產(chǎn)物，加10UMspⅠ限制性內(nèi)切酶，37℃水浴4h，酶切產(chǎn)物經(jīng)2.0%瓊脂糖凝膠(含0.5μg/ml溴化乙錠)電泳6

6、0min，電壓100V，在凝膠成像分析儀上觀察結(jié)果。　　1.5CYP1A1MspⅠ基因型測定擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)酶切后分為3種基因型：沒有MspⅠ切割位點(diǎn)的等位基因?yàn)榧兒献踊蛐蚑T(野生型)，可見340bp一個片段;有MspⅠ切割位點(diǎn)的等位基因?yàn)榧兒献踊蛐虲C(突變型)，可見200及140bp兩個片段;雜合子基因型TC(雜合型)，可見340、200、140bp3個片段?！　?.6統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS11.5軟件，分析等位基因和基因型頻率分布，檢驗(yàn)群體基因型頻率分布是否符合HardyspⅠ多態(tài)分布，張家口地區(qū)中青年健康人群該多態(tài)位點(diǎn)T及C等位基因的頻率分別為60.9%，39.1%。TT，TC，

7、CC基因型分布頻率分別為35.8%，50.2%，14.0%。經(jīng)χ2檢驗(yàn)基因型分布符合HardyspⅠ多態(tài)分布差異不顯著。該多態(tài)位點(diǎn)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的MspⅠ酶切電泳見圖1?！　?討論　　CYP1A1是細(xì)胞色素P450的同工酶，位于第15號染色體q22qter上，有7個外顯子和6個內(nèi)含子，基因全序列為6311個堿基對〔4，5〕。CYP1A1在肝臟總的CYP450含量中存在不到1%，但是參與2.5%的物質(zhì)代謝過程，廣泛分布