丹參對(duì)幼年大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)學(xué)習(xí)記憶及海馬chat

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1、丹參對(duì)幼年大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)學(xué)習(xí)記憶及海馬ChAT【摘要】目的：觀察丹參(RSM)對(duì)幼年大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)學(xué)習(xí)記憶及海馬膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)和乙酰膽堿酯酶(AChE)活性的影響。方法：戊四氮(PTZ)誘導(dǎo)大鼠SE,丹參(RSM)進(jìn)行干預(yù),苯巴比妥鈉(PB)作為對(duì)照，采用Morris水迷宮觀察大鼠空間記憶的改變，應(yīng)用勻漿比色法檢測(cè)大鼠海馬ChAT、AChE活性。結(jié)果：Morris水迷宮測(cè)試中PTZ組逃避潛伏期延長(zhǎng)(P<0.05),有效搜索策略百分比降低(P<0.01)，平臺(tái)象限游泳時(shí)間百分比降低(P

2、<0.01)，海馬ChAT、AChE活性降低(P<0.01)；RSM組SE后下降的ChAT、AChE活性有所提高，平均潛伏期較PTZ組顯著縮短，目標(biāo)象限停留時(shí)間顯著高于PTZ組，第13天有效搜索策略百分比高于PTZ組，第23天高于PB組(P<0.05)；PB組僅提高AChE活性，PB組平均潛伏期較PTZ組有縮短趨勢(shì)，但僅第1天有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，PB組目標(biāo)象限停留時(shí)間顯著高于PTZ組。結(jié)論：SE可使幼年大鼠學(xué)習(xí)記憶受損,ChAT、AChE可能參與這一變化的病理生理過(guò)程。丹參用藥可能通過(guò)修復(fù)海馬膽堿能系統(tǒng)改善

3、幼年大鼠SE學(xué)習(xí)記憶損傷?！娟P(guān)鍵詞】丹參癲癇持續(xù)狀態(tài)學(xué)習(xí)記憶膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶乙酰膽堿酯酶水迷宮30%50%的癲癇患兒伴有不同程度的學(xué)習(xí)記憶減退、注意力分散及社會(huì)適應(yīng)能力下降等認(rèn)知功能障礙，直接影響患兒生活質(zhì)量。大量研究證實(shí)，癲癇發(fā)作尤以癲癇持續(xù)狀態(tài)(statusepilepticus，SE)，不僅可引起暫時(shí)性腦功能障礙，且可致嚴(yán)重的器質(zhì)性腦損傷，進(jìn)而引起學(xué)習(xí)記憶及行為異常等嚴(yán)重后果。本實(shí)驗(yàn)探討了丹參(radixsalviaemiltiorrhizae，RSM)對(duì)幼年SE大鼠學(xué)習(xí)記憶損傷的改善作用。1材料與方法1.1材料及

4、儀器６周齡健康清潔級(jí)雄性SD大鼠(東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)62只,實(shí)驗(yàn)起始體質(zhì)量(110±20)g，12h光亮/黑暗條件、2225℃環(huán)境溫度,混合喂養(yǎng)。戊四氮(Sigma公司)，丹參注射液（四川升和制藥有限公司），苯巴比妥鈉注射液(天津金耀氨基酸有限公司)，乙酰膽堿酯酶（AchE）、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶（ChAT）試劑盒（南京建成生物工程研究所），大鼠Morris水迷宮[1]（中國(guó)藥科大學(xué)）,7530G可見紫外分光光度計(jì)(上海分析儀器廠)。1.2SE模型制備及實(shí)驗(yàn)分組參照文獻(xiàn)方法[2]建立動(dòng)物模型：戊四氮(pent

5、yleetrazole，PTZ)20mg·kg-1大鼠腹腔注射,然后每10min注射10mg·kg-1,直至達(dá)到足夠強(qiáng)度和SE持續(xù)發(fā)作。SE標(biāo)準(zhǔn):0級(jí)，無(wú)驚厥發(fā)作；Ⅰ級(jí)，點(diǎn)頭，眨眼，頸動(dòng)或濕狗樣顫抖；Ⅱ級(jí)，節(jié)律性點(diǎn)頭；Ⅲ級(jí)，頭部抽搐加前肢顫抖；Ⅳ級(jí)，第Ⅲ級(jí)加后肢站立；Ⅴ級(jí)，驚厥致跌倒，全身強(qiáng)直性抽搐。Ⅳ、Ⅴ級(jí)發(fā)作即為全身性驚厥大發(fā)作，持續(xù)30min及以上者為SE。將成功SE模型48只隨機(jī)分為模型對(duì)照組(PTZ組)24只，苯巴比妥組(PB組)12只，丹參組(RSM組)12只。另設(shè)生理鹽水對(duì)照組(NS組)12只，NS組大鼠

6、腹腔注射同等容量相同次數(shù)的生理鹽水。驚厥終止發(fā)作后12hRSM組腹腔注射復(fù)方丹參注射液10g·kg-1，PTZ組、NS組腹腔注射6ml·kg-1生理鹽水，PB組給予PB60mg·kg-1腹腔注射，每隔24h重復(fù)給等量藥1次，持續(xù)7d。各組動(dòng)物混合飼養(yǎng)，每日測(cè)體質(zhì)量以調(diào)整注射劑量。1.3大鼠Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)于7d給藥結(jié)束后開始進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),程序包括：(1)定位航行實(shí)驗(yàn)(placenavigationtask)用于測(cè)量大鼠對(duì)水迷宮學(xué)習(xí)和記憶的能力。實(shí)驗(yàn)歷時(shí)4.5d,每天分上、下午2個(gè)時(shí)段,共9個(gè)時(shí)段,每

7、時(shí)段訓(xùn)練4次。訓(xùn)練時(shí)隨機(jī)選擇1個(gè)象限(本實(shí)驗(yàn)選擇Sorris水迷宮實(shí)驗(yàn)完畢后直接斷頭取雙側(cè)海馬，勻漿比色法測(cè)定AChE、ChAT活性。AChE能使乙酰膽堿（ACh）水解成膽堿和乙酸,膽堿可以與巰基顯色劑反應(yīng)生成黃色化合物TNB(對(duì)稱三硝基苯，symtrinitrobenzene)，根據(jù)顏色深淺進(jìn)行比色定量，水解產(chǎn)物膽堿的數(shù)量可反映膽堿酯酶的活力。組織AChE活力定義為每g組織蛋白在37℃保溫6min，水解反應(yīng)體系中1μmol·L-1基質(zhì)為1個(gè)活力單位。具體操作按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。ChAT的測(cè)定是以乙酰輔酶A為底物，在

8、ChAT的作用下，反應(yīng)的生成物和顯色劑結(jié)合，在324nm處測(cè)定吸光度，以此計(jì)算ChAT的活力。酶單位定義為：在pH7.2條件下，2530℃時(shí)每克組織濕質(zhì)量每分鐘轉(zhuǎn)移1nmol乙酰基給膽堿的能力定義為一個(gè)酶活力單位。具體操作按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)結(jié)果均以x-±s表示，采用SPSS11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，