丹參對幼年大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)學習記憶及海馬chat、ache活性的影響論文

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1、丹參對幼年大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)學習記憶及海馬ChAT、AChE活性的影響論文【摘要】目的：觀察丹參(RSM)對幼年大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)學習記憶及海馬膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)和乙酰膽堿酯酶(AChE)活性的影響。方法：戊四氮(PTZ)誘導大鼠SE,丹參(RSM)進行干預,苯巴比妥鈉(PB)作為對照，采用Morris水迷宮觀察大鼠空間記憶的改變，應(yīng)用勻漿比色法檢測大鼠海馬ChAT、AChE活性。結(jié)果：Morris水迷宮測試中PTZ組逃避潛伏期延長(P0.05),有效搜索策略百分比降低(P0.01)，平臺象限游泳時間百分比降低(P0

2、.01)，海馬ChAT、AChE活性降低(P0.01)；RSM組SE后下降的ChAT、AChE活性有所提高，平均潛伏期較PTZ組顯著縮短，目標象限停留時間顯著高于PTZ組，第13天有效搜索策略百分比高于PTZ組.freeliltiorrhizae，RSM)對幼年SE大鼠學習記憶損傷的改善作用。1材料與方法1.1材料及儀器６周齡健康清潔級雄性SD大鼠(東南大學醫(yī)學院實驗動物中心提供)62只,實驗起始體質(zhì)量(110±20)g，12h光亮/黑暗條件、2225℃環(huán)境溫度,混合喂養(yǎng)。戊四氮(Sigma公司)，丹參注射液（四川升和制藥有限公

3、司），苯巴比妥鈉注射液(天津金耀氨基酸有限公司)，乙酰膽堿酯酶（AchE）、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶（ChAT）試劑盒（南京建成生物工程研究所），大鼠Morris水迷宮1（中國藥科大學）,7530G可見紫外分光光度計(上海分析儀器廠)。1.2SE模型制備及實驗分組參照文獻方法2建立動物模型：戊四氮(pentyleetrazole，PTZ)20mg·kg-1大鼠腹腔注射,然后每10min注射10mg·kg-1,直至達到足夠強度和SE持續(xù)發(fā)作。SE標準:0級，無驚厥發(fā)作；Ⅰ級，點頭，眨眼，頸動或濕狗樣顫抖；Ⅱ級，節(jié)律性點頭；Ⅲ級，頭部抽搐加

4、前肢顫抖；Ⅳ級，第Ⅲ級加后肢站立；Ⅴ級，驚厥致跌倒，全身強直性抽搐。Ⅳ、Ⅴ級發(fā)作即為全身性驚厥大發(fā)作，持續(xù)30min及以上者為SE。將成功SE模型48只隨機分為模型對照組(PTZ組)24只，苯巴比妥組(PB組)12只，丹參組(RSM組)12只。另設(shè)生理鹽水對照組(NS組)12只，NS組大鼠腹腔注射同等容量相同次數(shù)的生理鹽水。驚厥終止發(fā)作后12hRSM組腹腔注射復方丹參注射液10g·kg-1，PTZ組、NS組腹腔注射6ml·kg-1生理鹽水，PB組給予PB60mg·kg-1腹腔注射，每隔24h重復給等量藥1次，持續(xù)7d。各組動物混

5、合飼養(yǎng)，每日測體質(zhì)量以調(diào)整注射劑量。1.3大鼠Morris水迷宮實驗于7d給藥結(jié)束后開始進行Morris水迷宮實驗,程序包括：(1)定位航行實驗(placenavigationtask)用于測量大鼠對水迷宮學習和記憶的能力。實驗歷時4.5d,每天分上、下午2個時段,共9個時段,.freeltrinitrobenzene)，根據(jù)顏色深淺進行比色定量，水解產(chǎn)物膽堿的數(shù)量可反映膽堿酯酶的活力。組織AChE活力定義為每g組織蛋白在37℃保溫6min，水解反應(yīng)體系中1μmol·L-1基質(zhì)為1個活力單位。具體操作按試劑盒說明書進行。ChA

6、T的測定是以乙酰輔酶A為底物，在ChAT的作用下，反應(yīng)的生成物和顯色劑結(jié)合，在324nm處測定吸光度，以此計算ChAT的活力。酶單位定義為：在pH7.2條件下，2530℃時每克組織濕質(zhì)量每分鐘轉(zhuǎn)移1nmol乙酰基給膽堿的能力定義為一個酶活力單位。具體操作按試劑盒說明書進行。1.5統(tǒng)計學處理實驗所得數(shù)據(jù)結(jié)果均以x-±s表示，采用SPSS11.0軟件進行統(tǒng)計學分析，多組間比較采用單因素方差分析(oneg·kg-1、28只50mg·kg-1、16只60mg·kg-1PTZ即開始出現(xiàn)驚厥,主要表現(xiàn)為肌陣攣,伴有前肢陣攣的后肢站立,持續(xù)

7、13s。隨著PTZ每10min注射1次,進入全面性強直收縮階段的大鼠表現(xiàn)為失去姿勢控制,前、后肢伸肌強烈收縮,并伴有發(fā)紺。強直階段后出現(xiàn)全面性強直陣攣驚厥,大鼠SE持續(xù)時間在3090min,7只大鼠應(yīng)用PTZ60mg·kg-1、34只70mg·kg-1、9只80mg·kg-1發(fā)生SE，2只大鼠死于SE。幸存的大鼠自動恢復到基本活動水平。PTZ處理大鼠死亡率為10%。2.2Morris水迷宮實驗PTZ組定向航行實驗平均潛伏期延長(P0.01),RSM組平均潛伏期較PTZ組顯著縮短（1、2、4、5d）(P0.01)，PB組平均潛伏期

8、較PTZ組有縮短趨勢，但僅第1天有統(tǒng)計學意義（表1）。PTZ組空間探索試驗原平臺所在象限停留時間較NS組變短（P0.05）,分別為（41.0±8.3）、（57.5±16.3）s；RSM及PB組目標象限停留時間顯著高于PTZ組（P0.05），分別為（59.2±18