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《短程免疫法制備免疫血清的方法和效果》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、短程免疫法制備免疫血清的方法和效果【關(guān)鍵詞】免疫學技術(shù)免疫血清抗原［ABSTRACT］ObjectiveToexplorethemethodoffast-preparingantiserumanditseffect.MethodsUsingshort-rangeimmunization,rabbitsmunizedultipleinoculations,theantiserumimmunizedbyE.coliantigen,SEAandyolkantigenreached1∶10240,1∶1200and1∶10240;respective
2、ly.ConclusionTheantiserumpreparedbythistechniqueistime-saving,high-potencyandhigh-affinity,ent.［KEYmunologytechnique;Immuneserum;Antigen免疫血清是經(jīng)過抗原免疫的動物血清，含有特異性免疫球蛋白(Ig)，可直接應(yīng)用于病原體的診斷或感染性疾病的緊急預(yù)防和治療，也可通過進一步純化血清中的Ig，用于多種疾病的診斷和治療，是一種非常重要的生物制品。制備免疫血清成為學生必需具備的實驗技術(shù)。在以往的免疫血清制備實驗課中,制備
3、高效價免疫血清基本采用大劑量長程免疫法，該方法具有產(chǎn)物效價高、親和力強的優(yōu)點，但耗時過長，給研究造成一定的影響。為了探索快速制備免疫血清的新方法,本研究選取大腸桿菌抗原和綿羊紅細胞(SRBC)抗原作為顆粒性抗原，選取雞蛋黃抗原作為可溶性抗原［1］,采用小劑量短程免疫法制備免疫血清,以探討該方法的可行性。1材料和方法1.1試劑與器材1.1.1抗原大腸桿菌（泰山醫(yī)學院臨床微生物學教研室保存），SRBC，新鮮雞蛋。1.1.2實驗動物健康家兔32只，雄性，體質(zhì)量2.0～2.5kg，無免疫史，由泰山醫(yī)學院實驗動物中心提供。隨機分成大腸桿菌抗原組、SRB
4、C抗原組、雞蛋黃抗原組、生理鹽水對照組，每組8只。1.1.3器材與試劑紫外線分光光度計；搖床恒溫水浴箱；離心機；振蕩器；滅菌大試管；LB液體培養(yǎng)基或肉湯培養(yǎng)基；麥氏比濁管；體積分數(shù)0.05石炭酸溶液；磷酸鹽緩沖液；鹽酸溶液；HRP-Ab等。所有實驗用材料均經(jīng)滅菌處理。1.2抗原的制備1.2.1大腸桿菌抗原的制備將大腸桿菌接種到營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)皿上，37℃培養(yǎng)18~24h，取單菌落接種于LB液體培養(yǎng)基或肉湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)18~24h，按照1%的比例轉(zhuǎn)種于LB液體培養(yǎng)基或肉湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)18~24h，收集培養(yǎng)液。沸水浴1h后3000r/
5、min離心10min，棄去上清。麥氏比濁法鑒定大腸桿菌，用石炭酸生理鹽水稀釋其含量至1012/L，取少許做無菌實驗，其余菌懸液放冰箱保存。1.2.2SRBC抗原制備無菌抗凝綿羊血2000r/min離心5min，吸去上清，加入等量無菌生理鹽水混勻，再次2000r/min離心5min，吸去上清，如此連續(xù)洗3次，最后1次離心10min以使紅細胞密集管底，直至上清液透明無色再吸去上清液，留密集紅細胞備用。用無菌生理鹽水將紅細胞配成體積分數(shù)0.20的SRBC懸液，即為實驗用SRBC懸液。1.2.3雞蛋黃抗原的制備取新鮮雞蛋1個，用體積分數(shù)0.75乙醇消
6、毒，在無菌條件下，于氣室一端擊一小孔，用無菌吸管將蛋清吸出后，將蛋黃倒入一裝有玻璃珠的無菌錐形瓶內(nèi)搖勻，用生理鹽水進行1∶5稀釋，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?.3免疫方案［1,2］1.3.1大腸桿菌抗原組首先在頸背部多點皮下接種大腸桿菌菌液抗原1.0mL，第2天在頸背部多點皮下接種菌液抗原0.5mL，第3、4天每天于耳靜脈注入菌液0.5mL，第5天于耳靜脈注入菌液抗原1.0mL。1.3.2SRBC抗原組首先在頸背部多點皮下接種體積分數(shù)0.20的SRBC抗原2.0mL，第2天在頸背部多點皮下接種體積分數(shù)0.20的SRBC抗原1.0mL，第3~5天每天
7、于耳靜脈注入體積分數(shù)0.20的SRBC抗原1.0mL。1.3.3雞蛋黃抗原組首先在頸背部多點皮下接種1∶5稀釋雞蛋黃抗原1.0mL，第2~4天每天于耳靜脈接種1∶5稀釋雞蛋黃抗原0.5mL，第5天于耳靜脈注入1∶5稀釋雞蛋黃抗原1.0mL。1.3.4生理鹽水對照組首先在頸背部多點皮下接種生理鹽水2.0mL，第2天在頸背部多點皮下接種生理鹽水1.0mL，第3~5天每天于耳靜脈注入生理鹽水1.0mL。1.4試血末次免疫后第3天，耳動脈采血2mL，37℃溫育1h后，2000r/min離心10min，吸取離心后上清液0.2mL于無菌試管中，再加入0.
8、8mL生理鹽水，作1∶5稀釋。采用試管凝集試驗方法測定大腸桿菌及SRBC抗原免疫血清效價，瓊脂凝膠雙向擴散試驗方法測定蛋黃抗原免疫血清效價。2結(jié)果2.1免疫血清的初
