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《大黃蟲丸經(jīng)旁分泌途徑對早期肝纖維化的干預(yù)作用》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、大黃蟲丸經(jīng)旁分泌途徑對早期肝纖維化的干預(yù)作用作者：成家茂，潘志恒，謝瑤，何宏文，曲懷剛【摘要】 目的觀察大黃蟲丸經(jīng)旁分泌途徑對大鼠肝星狀細(xì)胞增殖及其表達(dá)TGF-β1基因的影響。 方法采用Nycodenz分離液非連續(xù)密度梯度離心法同步分離急性CCl4損傷模型大鼠和正常大鼠肝的枯否細(xì)胞（KC）和星狀細(xì)胞（HSC）。在制備正常鼠血清和大黃蟲丸藥物血清的基礎(chǔ)上，將它們分別加入KC培養(yǎng)板內(nèi)作用48h后制備成正常鼠KC條件培養(yǎng)液（NKCCM）和損傷鼠KC條件培養(yǎng)液（KCCM）。將NKCCM和KCCM作用于活化的HSC24h后，采用MTT法和3H-TdR摻入法檢測HSC增殖的變化；采用半定量RT-PCR
2、法擴(kuò)增TGF-β1mRNA以檢測HSC表達(dá)TGF-β1基因的情況。 結(jié)果旁分泌組各組的HSC增殖幅度及TGF-β1基因的相對表達(dá)量較正常對照組NKCCM組均明顯增加（P＜0.05或0.01）。同時(shí)旁分泌組中，含藥血清作用的5%，10%和20%KCCM組較無藥物血清作用的0%KCCM組HSC的增殖能力及TGF-β1基因的相對表達(dá)量則下降，且隨藥物濃度的升高逐漸降低，其組間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論大黃蟲丸可明顯抑制經(jīng)旁分泌途徑活化的大鼠HSC的增殖及TGF-β1基因的表達(dá)，且其抗肝纖維化效應(yīng)與藥物劑量間存在一定的依賴關(guān)系?！娟P(guān)鍵詞】大黃蟲丸 肝纖維化 肝星狀細(xì)胞 旁分
3、泌 Abstract：ObjectiveToobservetheeffectsofDahuangZhechongPillontheproliferationofrathepaticstellatecells(HSCs)activatedbyparacrinepathinggroalratKupffercells(KCs),hepaticstellatecellsedium.Afterthemonratandthedrugseraprepared,theyalKupffercellsconditionedmedium(NKCCM)andinjuredratKupffercellscondit
4、ionedmedium(KCCM)after48h.TTand3H-thymidine(3H-TdR)incorporationassay,andtheexpressionofTGF-β1geneinHSCsbysemi-quantitativeRT-PCRedium.ResultsInallparacrinegroups,themultiplicationofHSCsandtherelativeexpressionofTGF-β1genearkedlyparedtonormalcontrolgroup(P＜0.05orP＜0.01),andgraduallydecreasedinalldr
5、ugandnodrugserumgroupsongallgroups.ConclusionDahuangZhechongPillcanobviouslyinhibittheproliferationofratHSCsactivatedbyparacrinepathanner. Keyinggroa公司；四氯化碳（CCl4）、高純度瓊脂糖、核酸染料等生化試劑購自上海生物工程有限公司；M199培養(yǎng)液（標(biāo)準(zhǔn)型）、DMEM干粉均購自Invitrogen公司產(chǎn)品；標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清（fetalbovineserum，F(xiàn)BS）購自杭州四季青生物制品公司；總RNA提取試劑（RNAisoReagent）、RT-
6、PCR試劑盒（TaKaRaRNAPCRKit(AMV)Ver.3.0）及100bpDNAMarkers均購自寶生物工程（大連）有限公司；引物由上海英駿生物技術(shù)有限公司合成；氚-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）購自中國科學(xué)院上海原子核研究所等。OLYMPUSCX31型倒置相差顯微鏡（OLYMPUS公司）；HeraeusBiofuge15R型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（德國Heraeus公司）；HeraeusBB16型CO2恒溫培養(yǎng)箱（德國Heraeus公司）；SDJ-SP三相單人水平層流潔凈工作臺(tái)（上海淀山湖凈化廠）；FJ-211G雙道液體閃爍儀（西安二六二廠產(chǎn)品）；Bio-TekEL×800型全自動(dòng)酶標(biāo)
7、儀（美國Bio-Tek公司產(chǎn)品）；POJPTC-100TM型PCR儀（美國MJRearch公司產(chǎn)品）；BIO-MATE5型紫外可見光分光光度計(jì)（BIO-MATE日本公司生產(chǎn)）等?！ ?方法 2.1含藥血清及正常鼠血清的制備參考 3結(jié)果 3.1條件培養(yǎng)液對活化HSC增殖的影響旁分泌組和正常對照組CM對活化的HSC作用24h后，MTT法檢測各組的OD值為：NKCCM（0.375±0.056）、0%KCCM（
