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1、HCV感染者外周血T細(xì)胞PD.L.編輯?！菊磕康奶接慔CV感染者外周血T細(xì)胞程序性死亡受體1(programmedcelldeath1,PD-1)表達(dá)情況及與血清學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性。方法應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)43例HCV感染者外周血T淋巴細(xì)胞PD-1及其配體B7-H1水平，與29例正常健康人作比較；COBASAMPLICOR自動(dòng)載量?jī)x檢測(cè)HCV感染者血清病毒載量，同時(shí)進(jìn)行肝功能檢測(cè)。結(jié)果HCV感染組T細(xì)胞PD-1/B7-H1表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組（P<0.01）；HCVRNA陽(yáng)性組外周血T細(xì)胞PD-1表達(dá)水平與病毒載量存在統(tǒng)計(jì)學(xué)正相關(guān)關(guān)系(r=0.442，P<0.01)；HCV
2、感染組PD-1分子的表達(dá)水平與血清轉(zhuǎn)氨酶成正相關(guān)(r=0.626，P<0.01)。結(jié)論HCV感染后外周血T細(xì)胞PD-1表達(dá)水平明顯升高，從而抑制T細(xì)胞的免疫功能，導(dǎo)致病毒持續(xù)感染并造成肝細(xì)胞進(jìn)一步損傷?！娟P(guān)鍵詞】丙型肝炎病毒細(xì)胞程序性死亡受體1病毒載量【Abstract】0bjective:Toinvestigatetheexpressionofprogrammedcelldeath1inperipheralTlymphocytesinpatientsarkers.Methods:TechniquesoffloetryandCOBASAMPLICORphocytesandvira
3、lloadof43patientseasured.Results:1evelsofPD-1andB7-H1phocytesandviralloadinpositiveHCV-RNApatients(r=0.442，P<0.01).moreover,the1evelofPD-1inpatientsmunefunctionofTlymphocytesandthusleadstotheviruspersistentinfectionandfurtherdamageofhepaticcells.【Keypus生化分析儀檢測(cè)。1.3 實(shí)驗(yàn)方法1.3.1密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞離心
4、管中加入Ficoll-Hypaque淋巴細(xì)胞分離液15ml，沿管壁緩慢加入用PBS稀釋后的抗凝全血30ml，離心400g，30min。用毛細(xì)管吸取界面層的PBMC并加入5倍體積的PBS緩沖液，洗滌細(xì)胞2次。1.3.2外周血B7-H1/PD-1表達(dá)檢測(cè)向3支流式管中各加入1x106密度梯度離心法分離的HCV感染者及健康人PBMC，每管加入熒光標(biāo)記的單抗CD3-PerCP、10ul，CD3-PerCP、B7-H1-PE各10ul,CD3-PerCP、PD-1-PE各10ul，混勻后4℃避光染色30分鐘，用PBS洗滌后加入含1%多聚甲醛的PBS重懸，F(xiàn)ACSAria流式細(xì)胞儀Diva軟件進(jìn)行
5、分析。1.3.3病毒載量檢測(cè)以200μl血漿采用標(biāo)準(zhǔn)版模板制備法提取RNA，采用Roche公司HIV-1Monitor1.5mercialkit在COBASAMPLICOR自動(dòng)載量?jī)x上以RT-PCR方法測(cè)定病毒載量。HIV-1感染者的病毒載量轉(zhuǎn)化為以10為底的對(duì)數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。1.3.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)采用±s表示，健康人與患者B7-Hl和PD-1表達(dá)水平的比較經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)，兩組間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，Spearman法進(jìn)行組間相關(guān)性分析。2結(jié)果2.1HCV感染者外周血T細(xì)胞PD-1及B7-H1的表達(dá)水平和健康對(duì)照相比，HCV感染者外周血T細(xì)胞PD
6、-1及B7-H1的表達(dá)水平顯著增高（P值<0.01）2.2PD-1表達(dá)水平與病毒載量的相關(guān)性32例RNA陽(yáng)性的HCV感染者病毒載量與外周血T細(xì)胞PD-1表達(dá)水平呈明顯正相關(guān)（r=0.442，PP<0.01）2.3HCV感染組PD-1分子的表達(dá)與血清轉(zhuǎn)氨酶水平的相關(guān)性進(jìn)一步分析顯示，HCV感染者外周血T細(xì)胞PD-1表達(dá)水平與血漿ALT水平呈明顯正相關(guān)（r=0.626，P<0.01）。3討論HCV感染的特點(diǎn)是外周血和肝臟中存在病毒特異性T細(xì)胞，但卻缺乏功能強(qiáng)大、表型成熟的HCV特異性CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞[7]。HCV感染后導(dǎo)致特異性免疫應(yīng)答水平快速下降，這可能是
7、病毒本身造成的特異性免疫應(yīng)答削弱的結(jié)果。事實(shí)上，人類(lèi)由于HCV造成的適應(yīng)性免疫應(yīng)答削弱方面已有關(guān)于樹(shù)突狀細(xì)胞和輔助性T細(xì)胞的報(bào)道。最近，一些研究表明，HCV感染后依賴CD4+T細(xì)胞的效應(yīng)性CD8+T細(xì)胞功能減弱，這和在HIV感染者身上的發(fā)現(xiàn)類(lèi)似。而要維持一個(gè)強(qiáng)有力的、持續(xù)的T細(xì)胞應(yīng)答就必須傳遞給T細(xì)胞三個(gè)信號(hào)[8]:一是通過(guò)T細(xì)胞受體傳遞；二是通過(guò)表達(dá)在T細(xì)胞和抗原提呈細(xì)胞上的共刺激分子傳遞；三是通過(guò)應(yīng)答T細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子傳遞。其中一個(gè)或多個(gè)
