資源描述：
《慢性hbv感染者外周血單個核細胞干擾素》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、慢性HBV感染者外周血單個核細胞干擾素：陳瑞琳，藺淑梅，張樹林，葉峰，張曦，趙英仁【摘要】 目的探討慢性乙肝病毒(HBV)感染者干擾素-γ(IFN-γ)的表達水平及其影響因素。方法采用實時定量RT-PCR技術和ELISA法分別檢測慢性HBV感染者外周血單個核細胞(PBMCs)中IFN-γmRNA的表達和血清IFN-γ的分泌水平；巢式PCR技術檢測PBMCs中HBVDNA。結果慢性HBV感染者IFN-γ的表達和分泌水平均明顯低于對照組(P<0.01，P<0.05)；慢性HBV攜帶者IFN-γ的表達和
2、分泌水平均顯著低于HBeAg陽性組(P均<0.05)和HBeAg陰性組(P均<0.01)；HBeAg陽性組IFN-γ的表達和分泌水平均明顯低于HBeAg陰性組(P均<0.01)；PBMCs中HBVDNA陽性組IFN-γ的表達和分泌水平均明顯低于HBVDNA陰性組(P均<0.01)；IFN-γ表達和分泌水平與血清HBVDNA水平均呈負相關(P均<0.01)。結論慢性HBV感染者IFN-γ低表達；高病毒載量可抑制IFN-γ的表達?！娟P鍵詞】乙型病毒性肝炎乙型肝炎病毒核酸(HBVDNA)
3、外周血單個核細胞干擾素-γ(IFN-γ) ABSTRACT:ObjectiveTostudytheexpressionofinterferon-γ(IFN-γ)inperipheralbloodmonocytes(PBMCs)inpatientsayaffectitsexpression.MethodsTheexpressionofIFN-γmRNAandsecretionofIFN-γinchronicHBVinfectiouspatientsinedbyreal-timeRT-PCRandELISA,re
4、spectively;HBVDNAinPBMCsPBMCspositivegroupthaninHBVDNAnegativegroup(P<0.01,P<0.01);theexpressionandsecretionofIFN-γountsofHBVDNAinserum(P<0.01,P<0.001).ConclusionTheexpressionofIFN-γinchronicHBVinfectiouspatientsountsofHBVDNAmayinhibittheexpressi
5、onofIFN-γ. KEYCs)中乙肝病毒核酸；另一份按1×107個細胞/mL加入1mLTRIzolReagent(美國invitrogen公司)，-70℃凍存，用于提總RNA。同時收集健康對照組未抗凝及抗凝血作為對照。 1.3巢式PCR檢測PBMCs中的HBVDNA 引物設計在HBV的S基因保守序列，外側上游引物序列：5′-CATCTTCTTGTTGGTTCTTCTG-3′，下游引物序列：5′-TTAGGGTTTAAATGTATACCC-3′；內側上游引物序列：5′-TCTATGTTTCCCTCTTG
6、TTGC-3′，下游引物序列：5′-TACCACATCATCCATATAACTG-3′。PCR體系與反應條件：總體積25μL，包括2.5μL10×緩沖液(Buffer含20mmol/LMg2+)，1μL100μmol/LdNTPs，外側引物各1μL(終濃度為0.2μmol/L)，待測模板5μL，TaqDNA聚合酶0.2μL(1u)，純水補足至25μL。次輪PCR體系：取首輪PCR產物1μL作為待測模板，余與首輪PCR體系相同。PCR反應條件：預變性94℃300s、94℃60s、58℃50s、72℃60s，30個
7、循環(huán)，72℃延伸10min。擴增產物長度分別為416bp、206bp。每次實驗均設陽性、陰性及空白對照。陽性對照為已知CHB患者的血清，陰性對照為正常人PBMCs中DNA，空白對照為不加模板的PCR反應體系。PCR產物經15g/L瓊脂糖凝膠電泳分析?！ ?.4PBMCs中總RNA的提取 常溫解凍TRIzolReagent保存的PBMCs，按TRIzol試劑說明書提取總RNA。用比色法(紫外線下吸收峰值)測定RNA濃度A260/A280比值，比值在1.8-2.0者用于后續(xù)實驗?！ ?.5cDNA合成及實時定量R
8、T-PCR 用Re-vertAidTMFirstStrandcDNASynthesisKit(立陶宛Fermentas公司)將上述方法提取的總RNA2μg分別逆轉錄為cDNA。IFN-γ及內對照β-actin擴增引物均由大連TaKaRa公司設計和合成。IFN-γ上游引物：5′-GCAGCCAACCTAAGCAAG-3′(nt893-911)，下游引物：5′-TCACCTGACACAT
