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《外周血單個(gè)核細(xì)胞hbv的復(fù)制狀態(tài)與干擾素-γ表達(dá)和分泌的關(guān)系》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、外周血單個(gè)核細(xì)胞HBV的復(fù)制狀態(tài)與干擾素-γ表達(dá)和分泌的關(guān)系作者：陳天艷，陳瑞琳，藺淑梅，葉峰，張曦，陳云茹，趙英仁，張樹林【摘要】 目的:研究HBV侵犯外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）及對(duì)IFN-γ表達(dá)和分泌的影響.方法:慢性HBV感染者60例，巢式PCR檢測(cè)PBMC中HBV共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（cccDNA）；ELISA法檢測(cè)血清IFN-γ水平；實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法檢測(cè)PBMC中IFN-γmRNA的表達(dá)水平.結(jié)果:48.3%（29/60）的患者PBMC中檢測(cè)到cccDNA；血清IFN-γ水平低于對(duì)照組（P＜0.05）；PBMC中
2、IFN-γmRNA表達(dá)水平低于對(duì)照組（P＜0.01）；PBMC中cccDNA陽性組IFN-γ表達(dá)和分泌水平低于cccDNA陰性組（P＜0.01）.結(jié)論：HBV慢性感染者PBMC中IFN-γ表達(dá)和分泌水平降低.【關(guān)鍵詞】肝炎病毒乙型DNA環(huán)狀外周血單個(gè)核細(xì)胞干擾素Ⅱ型 【Abstract】AIM:TostudyhowHBVaffecttheexpressionandsecretionofIFN-γinPBMC.METHODS:sittypatientswithchronichepatitisBwerestudied.HBVcccDN
3、AinPBMCwere9amplifiedbynest-PCR.ThelevelofIFN-γintheserumwasdeterminedbyELISA.TheexpressionofIFN-γmRNAinPBMCwasdeterminedbyreal-timeRT-PCR.RESULTS:HBVcccDNAinPBMCweredeterminedby48.3%（29/60）inpatients.TheserumlevelofIFN-γinthepatientswaslowerthanthatincontrolgroup(P＜0.
4、05).TheexpressionofIFN-γinPBMCwsalowerinthepatientsthanincontrolgroup(P＜0.01).TheexpressionandsecretionofIFN-γwerelowerincccDNApositivegroupthanincccDNAnegativegroup（P＜0.01）.CONCLUSION:TheexpressionandsecretionofIFN-γinpatientswithchronichepatitisBaredecreased. 【Keywo
5、rds】hepatitisBvirus;DNA,circular;peripheralbloodmonocytes;interferontypeⅡ 0引言 HBV感染慢性化是機(jī)體免疫功能紊亂，主要是細(xì)胞免疫功能低下所致，Th1/Th2細(xì)胞亞群的失衡與HBV持續(xù)感染密切相關(guān).IFN-γ主要由活化的Th1細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生，可通過多種途徑直接或間接促進(jìn)Th1應(yīng)答，提高細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL），自然殺傷細(xì)胞（NK），單核-巨噬細(xì)胞活性，在清除HBV感染的細(xì)胞免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用.IFN-γ9活性水平直接反映了Th1細(xì)胞的功能，與H
6、BV感染后的最終結(jié)局密切相關(guān).因此，在證實(shí)HBV侵犯PBMC基礎(chǔ)上，我們進(jìn)一步比較慢性HBV感染者PBMC中cccDNA陽性和陰性組IFN-γ表達(dá)和分泌水平，以了解HBV侵犯PBMC并在其中復(fù)制對(duì)免疫細(xì)胞功能的影響. 1材料和方法 1.1材料2007-01/2007-05慢性HBV感染者60(男43，女17)例，年齡15～52（平均34.7）歲.診斷標(biāo)準(zhǔn)符合2000年制定的《病毒性肝炎防治方案》標(biāo)準(zhǔn).所有患者均排除HAV，HCV，HDV，HEV，柯薩奇病毒等感染和藥物、酒精等其他原因造成的肝臟損害.健康對(duì)照者30例，均來自西安市
7、健康獻(xiàn)血員.無菌采集未抗凝靜脈血2mL,-4℃離心后立即分離血清，-20℃凍存；肝素抗凝靜脈血10mL，常規(guī)密度梯度法分離淋巴細(xì)胞，洗滌細(xì)胞5次，分別收集第5次洗液和細(xì)胞.將細(xì)胞分2份，一份-70℃保存，用于檢測(cè)乙肝病毒核酸；另一份按1×1010/L細(xì)胞密度加入1mLTrizolReagent，-70℃凍存，用于提取總RNA.TrizolReagent(美國(guó)invitrogen公司),綠豆芽核酸酶（MBN）（美國(guó)Promega公司）,HighPureViralNucleicAcid試劑盒（Roche公司）,Rer-vertAidTM
8、FirstStrandcDNASynthesisKit(Fermentas公司),HumanIFN-γELISAKit(美國(guó)Bender公司),擴(kuò)增引物均由大連Takara公司設(shè)計(jì)和合成. 1.2方法用HighPureViralNu
