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1、外周血單個核細胞HBV的復制狀態(tài)與干擾素-γ表達和分泌的關系作者：陳天艷，陳瑞琳，藺淑梅，葉峰，張曦，陳云茹，趙英仁，張樹林【摘要】 目的:研究HBV侵犯外周血單個核細胞（PBMC）及對IFN-γ表達和分泌的影響.方法:慢性HBV感染者60例，巢式PCR檢測PBMC中HBV共價閉合環(huán)狀DNA（cccDNA）；ELISA法檢測血清IFN-γ水平；實時定量RT-PCR方法檢測PBMC中IFN-γmRNA的表達水平.結果:48.3%（29/60）的患者PBMC中檢測到cccDNA；血清IFN-γ水平低于對照組（P＜0.05）；PBMC中IFN-γmRNA表達水平低于對照組（
2、P＜0.01）；PBMC中cccDNA陽性組IFN-γ表達和分泌水平低于cccDNA陰性組（P＜0.01）.結論：HBV慢性感染者PBMC中IFN-γ表達和分泌水平降低.【關鍵詞】肝炎病毒乙型DNA環(huán)狀外周血單個核細胞干擾素Ⅱ型 【Abstract】AIM:TostudyhowHBVaffecttheexpressionandsecretionofIFN-γinPBMC.METHODS:sittypatientswithchronichepatitisBwerestudied.HBVcccDNAinPBMCwereamplifiedbynest-PCR.Theleve
3、lofIFN-γintheserumwasdeterminedbyELISA.TheexpressionofIFN-γmRNAinPBMCwasdeterminedbyreal-timeRT-PCR.RESULTS:HBVcccDNAinPBMCweredeterminedby48.3%（29/60）inpatients.TheserumlevelofIFN-γinthepatientswaslowerthanthatincontrolgroup(P＜0.05).TheexpressionofIFN-γinPBMCwsalowerinthepatientsthaninc
4、ontrolgroup(P＜0.01).TheexpressionandsecretionofIFN-γwerelowerincccDNApositivegroupthanincccDNAnegativegroup（P＜0.01）.CONCLUSION:TheexpressionandsecretionofIFN-γinpatientswithchronichepatitisBaredecreased. 【Keywords】hepatitisBvirus;DNA,circular;peripheralbloodmonocytes;interferontypeⅡ 0引
5、言 HBV感染慢性化是機體免疫功能紊亂，主要是細胞免疫功能低下所致，Th1/Th2細胞亞群的失衡與HBV持續(xù)感染密切相關.IFN-γ主要由活化的Th1細胞和NK細胞產生，可通過多種途徑直接或間接促進Th1應答，提高細胞毒性T細胞（CTL），自然殺傷細胞（NK），單核-巨噬細胞活性，在清除HBV感染的細胞免疫反應中發(fā)揮著重要作用.IFN-γ活性水平直接反映了Th1細胞的功能，與HBV感染后的最終結局密切相關.因此，在證實HBV侵犯PBMC基礎上，我們進一步比較慢性HBV感染者PBMC中cccDNA陽性和陰性組IFN-γ4表達和分泌水平，以了解HBV侵犯PBMC并在其中復
6、制對免疫細胞功能的影響. 1材料和方法 1.1材料2007-01/2007-05慢性HBV感染者60(男43，女17)例，年齡15～52（平均34.7）歲.診斷標準符合2000年制定的《病毒性肝炎防治方案》標準.所有患者均排除HAV，HCV，HDV，HEV，柯薩奇病毒等感染和藥物、酒精等其他原因造成的肝臟損害.健康對照者30例，均來自西安市健康獻血員.無菌采集未抗凝靜脈血2mL,-4℃離心后立即分離血清，-20℃凍存；肝素抗凝靜脈血10mL，常規(guī)密度梯度法分離淋巴細胞，洗滌細胞5次，分別收集第5次洗液和細胞.將細胞分2份，一份-70℃保存，用于檢測乙肝病毒核酸；另一
7、份按1×1010/L細胞密度加入1mLTrizolReagent，-70℃凍存，用于提取總RNA.TrizolReagent(美國invitrogen公司),綠豆芽核酸酶（MBN）（美國Promega公司）,HighPureViralNucleicAcid試劑盒（Roche公司）,Rer-vertAidTMFirstStrandcDNASynthesisKit(Fermentas公司),HumanIFN-γELISAKit(美國Bender公司),擴增引物均由大連Takara公司設計和合成. 1.2方法用HighPureViralNuc
