固體發(fā)酵黑曲霉產(chǎn)單寧酶的研究碩士學(xué)位論文

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1、貴州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文固體發(fā)酵黑曲霉產(chǎn)單寧酶的研究目錄目錄i中文摘要iAbstractii第一章文獻(xiàn)綜述11.1引言11.2單寧酶的性質(zhì)21.2.1單寧酶的理化性質(zhì)21.2.2單寧酶的酶學(xué)性質(zhì)21.3單寧酶分離純化及菌株篩選31.4單寧酶的酶活力測(cè)定41.5單寧酶的固定化51.5.1固定化酶的方法和特性51.5.2單寧酶的固定化51.6單寧酶的應(yīng)用61.6.1應(yīng)用于食品工業(yè)61.6.2制革工業(yè)71.6.3飼料工業(yè)71.6.4化妝品工業(yè)71.6.5精細(xì)化工與制藥工業(yè)71.7本課題立題意義和研究?jī)?nèi)容81.7.1本課題的立題意義81.7.2

2、本課題的研究?jī)?nèi)容8第二章產(chǎn)單寧酶黑曲霉菌株的誘變及篩選102.1前言102.2材料與設(shè)備102.2.1菌種102.2.2培養(yǎng)基102.2.3實(shí)驗(yàn)儀器112.3實(shí)驗(yàn)方法122.3.1實(shí)驗(yàn)菌種的培養(yǎng)及初步鑒定122.3.2出發(fā)菌株的篩選122.3.3紫外誘變132.3.4復(fù)篩方法132.3.5粗酶液的提取132.3.6酶活測(cè)定方法132.3.7單寧酶高活性菌株的產(chǎn)酶穩(wěn)定性132.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論142.4.1實(shí)驗(yàn)菌種的初步鑒定142.4.2出發(fā)菌株的篩選142.4.3紫外誘變篩選單寧酶高活性菌株15562.4.4單寧酶高活性菌株產(chǎn)酶穩(wěn)定性16

3、2.5本章小結(jié)17第三章單寧酶活力測(cè)定方法的構(gòu)建183.1前言183.2實(shí)驗(yàn)材料與方法183.2.1菌種183.2.2培養(yǎng)基193.2.4試劑193.2.5儀器193.2.5實(shí)驗(yàn)方法193.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論213.3.1沒食子酸吸收峰波長(zhǎng)213.3.2沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線及其回歸方程223.3.3單寧酶活力測(cè)定233.3.4單寧酶活力測(cè)定方法比較233.4本章小結(jié)24第四章固體發(fā)酵黑曲霉產(chǎn)單寧酶研究264.1前言264.2實(shí)驗(yàn)材料與方法264.2.1菌種264.2.2培養(yǎng)基264.2.3試劑274.2.4儀器274.2.5實(shí)驗(yàn)方法274.3實(shí)

4、驗(yàn)結(jié)果與討論304.3.1液體發(fā)酵法與固體發(fā)酵法的比較304.3.2黑曲霉產(chǎn)單寧酶固體發(fā)酵單因素條件研究314.3.3響應(yīng)面優(yōu)化結(jié)果354.4單寧酶產(chǎn)酶活力曲線394.5結(jié)論40第五章單寧酶的固定化415.1前言415.2實(shí)驗(yàn)材料415.2.1菌種415.2.2試劑425.2.3儀器425.3實(shí)驗(yàn)方法425.3.1單寧酶粗酶液的提取425.3.2單寧酶酶活測(cè)定425.3.3以海藻酸鈉為載體固定化單寧酶固定化方法的選擇425.3.4固定化單寧酶條件的優(yōu)化435.3.5固定化酶性質(zhì)的研究445.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論455.4.1海藻酸鈉為載體固定

5、化單寧酶固定化方法的選擇45565.4.2固定化單寧酶的條件研究455.4.3固定化酶的最適溫度495.4.4固定化酶的熱穩(wěn)定性505.4.5固定化酶的最適ph505.4.6固定化酶的貯藏穩(wěn)定性515.5本章小結(jié)51第六章結(jié)論與展望526.1結(jié)論526.2展望53參考文獻(xiàn)5456中文摘要單寧酶全稱是單寧酯酰水解酶（Tannase,EC3.1.1.20），它可以水解沒食子酸單寧中的酯鍵和縮酚羧鍵，生成沒食子酸和葡萄糖。單寧酶用途廣泛，主要來(lái)源于微生物，目前研究得較多較為深入的是青霉和黑曲霉。本論文利用紫外誘變的方法選育到一株產(chǎn)單寧酶的黑曲霉

6、菌株，對(duì)該菌株固體發(fā)酵產(chǎn)單寧酶的發(fā)酵工藝條件及發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，研究確立了固體發(fā)酵所產(chǎn)單寧酶的酶活檢測(cè)方法，論文還對(duì)產(chǎn)單寧酶的黑曲霉菌株發(fā)酵產(chǎn)單寧酶的固定化進(jìn)行了研究。頁(yè)：1本研究采用紫外誘變的菌種選育手段進(jìn)行黑曲霉菌株的誘變，用在平板培養(yǎng)基中加入微量的的溴酚藍(lán)（0.004%），利用黑曲霉生長(zhǎng)形成的變色圈大小對(duì)菌株進(jìn)行篩選，成功的選育到了一株產(chǎn)單寧酶達(dá)92U/mL的黑曲霉高產(chǎn)菌株。它的單寧酶活性較原始出發(fā)菌株提高了1倍多。頁(yè)：1論文首先研究和建立了適合固體發(fā)酵所產(chǎn)胞外單寧酶活性的檢測(cè)方法。此方法是根據(jù)沒食子酸（單寧酶催化沒食子酸丙酯水

7、解產(chǎn)生）與甲醇繞丹寧之間形成色團(tuán)物質(zhì)的方法來(lái)測(cè)定單寧酶的活性，沒食子酸丙酯做底物顯色明顯，選擇520nm波長(zhǎng)下檢測(cè)，成功的避開了干擾物質(zhì)的吸收峰波長(zhǎng)，減小了誤差，該方法對(duì)底物純度要求低，常規(guī)實(shí)驗(yàn)室的儀器就能進(jìn)行檢測(cè)，具有簡(jiǎn)便直觀、靈敏準(zhǔn)確、重復(fù)性好的特點(diǎn)。頁(yè)：1對(duì)選育的產(chǎn)單寧酶黑曲霉菌株進(jìn)行固體發(fā)酵產(chǎn)單寧酶研究，結(jié)果表明產(chǎn)單寧酶的最適氮源為NH4NO3，對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行單因素優(yōu)化結(jié)果表明：每5g培養(yǎng)基基質(zhì)含1％NH4NO3；0.1％NaCl；0.1％MgSO4；8％五倍子；90%麩皮。對(duì)發(fā)酵條件的單因素優(yōu)化后得到：初始水分含量50％，初始

8、ph6.0，溫度300C為最佳產(chǎn)酶條件。利用響應(yīng)面方法對(duì)顯著影響產(chǎn)單寧酶的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件因素進(jìn)行優(yōu)化，得到固體發(fā)酵黑曲霉誘變株最佳產(chǎn)單寧酶酶條件為：五倍子含量為9.5％；氮源NH4NO3添加