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1、HPLC法測(cè)定清熱潤(rùn)通膠囊中大黃素及大黃酚的含量【摘要】目的：測(cè)定清熱潤(rùn)通膠囊中大黃素及大黃酚的含量。方法：采用高效液相法，色譜柱為Yethods：HPLCedonYilipore－Q純水器。1.2藥品與試劑大黃素（批號(hào)：110756-200110，20mg）、大黃酚（批號(hào)：110796-200311，20mg）由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；清熱潤(rùn)通膠囊（批號(hào)：060308，山西省中醫(yī)藥研究院制劑中心提供）；甲醇（HPLC級(jí)，天津四友提供），其他試劑均為分析純。2實(shí)驗(yàn)方法2.1色譜條件色譜柱為Ym×4.
2、6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇－0.1%磷酸溶液（85∶15)；流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，柱溫為25℃。2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取適量大黃素對(duì)照品、大黃酚對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含大黃素9.16μg、大黃酚8.02μg的混合對(duì)照品溶液。2.3供試品溶液的制備精密稱定清熱潤(rùn)通膠囊的內(nèi)容物約2g，研細(xì)，加甲醇30mL，稱定重量，加熱回流提取1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液10mL，置燒瓶中，揮去溶劑，加8％鹽酸溶液10mL，超聲處理（功率2
3、50in，再加三氯甲烷15mL，于水浴上加熱回流1h，立即冷卻，置分液漏斗中，用三氯甲烷提取3次，每次15mL，合并三氯甲烷提取液，減壓回收溶劑至干，殘?jiān)舆m量甲醇溶解，并定容于10mL量瓶中，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液［2］。3結(jié)果3.1陰性空白試驗(yàn)按處方比例和工藝制備缺大黃的陰性空白樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性空白樣品溶液，測(cè)定。結(jié)果表明，空白對(duì)照品色譜圖在與標(biāo)準(zhǔn)品及樣品色譜圖相同位置上無大黃素及大黃酚的色譜峰，表明處方中其他藥味無干擾（結(jié)果見圖1）。3.2線性考察精密吸取大黃素（9.1
4、6μg/mL）及大黃酚（8.02μg/mL）對(duì)照品混合溶液，分別進(jìn)樣2.5μL、5μL、10μL、15μL、20μL，對(duì)所測(cè)得的峰面積（Y）和各對(duì)照品進(jìn)樣量（X）作回歸處理，得大黃素標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算得到大黃素回歸方程為：Y＝4419.805X＋2.492，相關(guān)系數(shù)r＝0.99992，表明大黃素在0.0229μg～0.1832μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積值有良好的線性關(guān)系。大黃素線性關(guān)系考察峰面積數(shù)值見表1。另外還得大黃酚標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算得到大黃酚回歸方程為：Y＝4493.147X－1.209，相關(guān)系數(shù)r＝1
5、.00000，表明大黃酚在0.0201μg～0.1608μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積值有良好的線性關(guān)系。大黃酚線性關(guān)系考察峰面積數(shù)值見表2。3.3精密度試驗(yàn)精密吸取大黃素（9.16μg/mL）及大黃酚（8.02μg/mL）對(duì)照品混合溶液，分別按上述含量測(cè)定色譜條件進(jìn)樣5次，測(cè)得大黃素精密度為：RSD=0.10％（n=5），大黃酚精密度為：RSD=0.20％（n=5），結(jié)果見表3。表明本方法精密度良好。3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別于0h、1h、2h、3h、4h、5h、6h進(jìn)樣測(cè)定，記錄大黃素峰面積，
6、RSD=1.12％，結(jié)果表明供試品溶液在6個(gè)小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)定。3.5重復(fù)性考察取同一批清熱潤(rùn)通膠囊（批號(hào)：060308），按上述含量測(cè)定色譜條件，測(cè)定大黃素及大黃酚含量，方法重復(fù)性結(jié)果，大黃素：RSD=2.24%（n=5），大黃酚：RSD=1.64%（n=5）為1.64，表明該方法重現(xiàn)性良好。3.6回收率試驗(yàn)取已知含量清熱潤(rùn)通膠囊內(nèi)容物5份，每份約2g，精密稱定，分別加入大黃素對(duì)照品溶液（0.052mg/mL）及大黃酚對(duì)照品溶液（0.086mg/mL）各1mL，按正文成品含量測(cè)定項(xiàng)下方法制備供試品溶液，于
7、含量測(cè)定色譜條件下測(cè)定、計(jì)算，大黃素的平均回收率為97.93％（RSD=1.75％），見表4。大黃酚的平均回收率為97.62％（RSD=1.18％），見表5。3.7樣品測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μL。按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算樣品中大黃素及大黃酚含量，測(cè)定結(jié)果見表6。4討論參照中國(guó)藥典（2005年版）大黃的含量測(cè)定方法及其他
