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《抗環(huán)斑病毒轉(zhuǎn)基因番木瓜55》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、抗環(huán)斑病毒轉(zhuǎn)基因番木瓜55【關(guān)鍵詞】,轉(zhuǎn)基因；番木瓜55-1； 摘要：目的建立對抗環(huán)斑病毒轉(zhuǎn)基因番木瓜55-1進(jìn)行品系鑒定的檢測方法。方法采用改良十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)法及試劑盒方法進(jìn)行番木瓜基因組DNA提取，根據(jù)番木瓜管家Papain基因和抗環(huán)斑病毒轉(zhuǎn)基因番木瓜55-1品系的外源結(jié)構(gòu)基因(35S-GUS)和調(diào)控基因(NOS-35S)序列設(shè)計(jì)合成特異性檢測引物，采用PCR技術(shù)對抗環(huán)斑病毒轉(zhuǎn)基因番木瓜55-1進(jìn)行品系鑒定。結(jié)果內(nèi)源Papain基因PCR擴(kuò)增結(jié)果表明，改良CTAB法及試劑盒方法都可用于番木瓜種籽及果肉的DNA提取。實(shí)驗(yàn)中合成的引物及建立的PCR反應(yīng)體
2、系、反應(yīng)參數(shù)能特異性地?cái)U(kuò)增轉(zhuǎn)基因番木瓜55-1的外源基因35S-GUS序列和NOS-35S序列。該方法的絕對檢測低限為815×10-2ng，相對檢測低限為014％。結(jié)論本檢測方法有較高的穩(wěn)定性，能有效地對轉(zhuǎn)基因番木瓜55-1進(jìn)行品系鑒定，該方法的檢測靈敏度可完全滿足轉(zhuǎn)基因食品標(biāo)識(shí)管理定性檢測的需要?！ ￡P(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)基因；番木瓜55-1； PCRPCRforevent-specificdetectionoftransgenicvirusresistantpapaya55-1 Abstract：ObjectivePCRassayethylAmmoniumBromide(CTA
3、B)methodandQiagenDNeasyplantminikitpapayaseedandfruit.SpecificprimersforPCRdetectionofpapaya55-1plifyendogenouspapaingenesequenceandexternalsegments,35S-GUSandNOS-35S,andcorrespondingdetectionmethodsplificationofpapaingeneindicatedthatboththedevelopedCTABmethodandQiagenDNeasyplantminikitpa
4、payaseedandfruit.Resultsofamplificationoftheexternalsegments(35S-GUSandNOS-35S)indicatedthatthedevelopedmethoditofdetection(LOD)ofthemethodgotto8.15×10-2ngand0.14%respectively.ConclusionThedevelopedPCRmethodcandetecttransgenicvirusresistantpapaya55-1speciallyanddetectivesensitivitycansatis
5、fytheneedofqualitativedetectionforgeicallymodifiedfoods. Keyodified;papaya55-1;PCR 番木瓜屬熱帶亞熱帶重要水果，為有效控制番木瓜環(huán)斑病毒(PRSV)對番木瓜產(chǎn)業(yè)的威脅，1998年世界上第1個(gè)轉(zhuǎn)基因番木瓜品系――抗環(huán)斑病毒轉(zhuǎn)基因番木瓜55-1在美國和加拿大獲準(zhǔn)商業(yè)種植〔1，2〕。從此轉(zhuǎn)基因番木瓜55-1以其獨(dú)特的抗病優(yōu)勢被廣泛種植，每年都有大量轉(zhuǎn)基因番木瓜流入國際水果市場。本研究采用改良十六烷基-三甲基-溴化銨(CTAB）法及試劑盒方法進(jìn)行番木瓜基因組DNA提取，根據(jù)番木瓜管家Papain基
6、因和抗環(huán)斑病毒轉(zhuǎn)基因番木瓜55-1品系的外源結(jié)構(gòu)基因(35S-GUS)和調(diào)控基因(NOS-35S)序列設(shè)計(jì)合成特異性檢測引物，采用PCR技術(shù)，建立對抗環(huán)斑病毒轉(zhuǎn)基因番木瓜55-1進(jìn)行品系鑒定的檢驗(yàn)方法，為今后轉(zhuǎn)基因番木瓜的標(biāo)識(shí)管理及安全性評價(jià)提供技術(shù)支持。 1材料與方法 11材料轉(zhuǎn)基因番木瓜55-1種籽由香港政府化驗(yàn)所友情提供。市場抽檢番木瓜購自深圳市翠竹萬佳超市及深圳市田貝一路街邊水果店?！ ?2儀器和試劑MJRPTC-220擴(kuò)增儀，SynGeneGeneGenius凝膠成像系統(tǒng)，EppendorfBiophotometer核酸蛋白分析儀。植物DNA提取試劑盒(美國Q
7、iagen公司)；TaqDNA聚合酶、UNG酶(美國Promega公司)?！ ?3DNA提取 131樣品前處理取番木瓜種籽，自然晾干后破碎至約05mm左右備用。番木瓜果肉直接破碎成泥，離心去水相后備用?！ ?32試劑盒DNA提取方法采用DNeasyPlantMiniKit試劑盒(美國Qiagen公司)，并按使用說明操作?！ ?33改良CTAB法取100mg處理好的樣品至2ml離心管中，加入500μl2％CTAB裂解液，65℃水浴30min。加入300μl氯仿／異戊醇(24：1)充分混合約5min，12000r／m
