htert啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的trail聯(lián)合放化療對(duì)hela裸鼠移植瘤生長(zhǎng)抑制的作用論文

《htert啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的trail聯(lián)合放化療對(duì)hela裸鼠移植瘤生長(zhǎng)抑制的作用論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。

1、hTERT啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的TRAIL聯(lián)合放化療對(duì)HeLa裸鼠移植瘤生長(zhǎng)抑制的作用論文張明辛?xí)匝嗬罴t梅宋輝【Abstract】AIM:TostudytheinhibitoryeffectofhTERTpromoterregulatedTRALLbinedoradiotherapyonthegroorofHeLacellsinnudemice.METHODS:TheTRAILgeneactivatedbythehTERTpromoterinedbyimmunohistochemicalstaining;Theratsothe

2、rapygroup,radiotherapygroup,binedtreatmentgroup(geransfection+chemoradiotherapy),andcontrolgroup,icesubcutaneously.ThebindedeffectsofTRAILoradiotherapyonthenodulationofthecervicalcancerHeLalinesororgroined.RESULTS:GFP/TRAILexpressionratee(P0.05).Thetransplante

3、dtumororsinhTERTTRAILgreorgrootherapygroupatorinnudemice.Thegenetransfectionplusradiochemotherapymayenlightenthefuturepreclinicalstudyandclinicaltherapyfortumors.【Keys;tumornecrosisfactorrelatedapoptosisinducingligand(TRAIL);telomerase;promoterregions(geics)

4、;cisplatin;neoplasmtransplantation;mice,nude;apoptosis【摘要】目的：探討hTERT啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的TRAIL聯(lián)合放化療對(duì)宮頸癌HeLa裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)抑制的作用.方法：將含有hTERT啟動(dòng)子的TRAIL基因載體轉(zhuǎn)染宮頸癌細(xì)胞HeLa，檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞中GFP/TRAIL的表達(dá)；實(shí)驗(yàn)裸鼠分為基因組，化療組，放療組，綜合組（基因+放化療），對(duì)照組，每組5只，未轉(zhuǎn)染HeLa組為對(duì)照組,不作任何處理；將穩(wěn)定轉(zhuǎn)染基因載體及未轉(zhuǎn)染的HeLa細(xì)胞種植于裸鼠背部皮下.freelorn

5、ecrosisfactorrelatedapoptosisinducedligand,.freeloterpIRES2EGFP由李紅梅博士惠贈(zèng).Lipofectamine2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑盒、G418購(gòu)自Invitrogen公司.胎牛血清購(gòu)自杭州四季青公司，DMEM購(gòu)自Gibco公司.cDDP為齊魯制藥廠產(chǎn)品.BALB/C裸鼠5~6L/L胎牛血清的DMEM于37℃，50mL/LCO2孵箱中培養(yǎng)傳代，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況，于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)收集細(xì)胞，以5×105細(xì)胞/孔接種于6孔板，過(guò)夜培養(yǎng).待細(xì)胞長(zhǎng)滿至

6、80%~85%板面積時(shí)，分別以hTERTpromoterpIRES2EGFPTRAIL載體,HeLa細(xì)胞，具體操作按Lipofectamine2000試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，同時(shí)以未轉(zhuǎn)染的HeLa細(xì)胞為陰性對(duì)照.轉(zhuǎn)染48h后，以含800g/LG418的選擇培養(yǎng)液進(jìn)行篩選.1.2.2轉(zhuǎn)染hTERTpromoterpIRES2EGFPTRAIL細(xì)胞的免疫熒光表達(dá)G418篩選后的抗性克隆擴(kuò)大培養(yǎng)，2.5g/L胰酶消化，制備細(xì)胞爬片，以950mL/L乙醇固定20min，0.01moL/LPBS振洗5min，免疫熒光染色采

7、用間接免疫熒光法檢測(cè)GFP/TRAIL的表達(dá).TRAILmAb（1∶400）,37℃孵育1h,FITC標(biāo)記兔抗小鼠IgG37℃45min,各步驟間用PBS(pH7.4)充分漂洗,磷酸甘油封片,于MRC1024型激光共聚焦掃描顯微鏡(CLSM)觀察攝片（激發(fā)波長(zhǎng)為488nm，共聚焦系統(tǒng)由BioRad公司提供的軟件控制），轉(zhuǎn)染3次細(xì)胞,利用軟件在鏡下隨機(jī)選取5個(gè)細(xì)胞，對(duì)其進(jìn)行定量分析，取平均值.1.2.3接種細(xì)胞和動(dòng)物分組1.2.3.1分組每組5只,對(duì)照組命名HeLa1，腹腔注射PBS0.2mL；實(shí)驗(yàn)組：命名HeLa

8、T基因組，腹腔注射PBS0.2mL；命名HeLaC為化療組，腹腔注射DDP，劑量為3mg/kg；命名HeLaR放療組，腹腔注射PBS0.2mL，放療劑量2Gy;命名HeLaRC為聯(lián)合組，放療劑量2Gy，放療前30min腹腔注射cDDP3mg/kg,放療2次.1.2.3.2接種細(xì)胞取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的轉(zhuǎn)染hTERTTRAIL細(xì)胞