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《丙型肝炎病毒不同片段抗體蛋白芯片的制備及評(píng)價(jià)論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、丙型肝炎病毒不同片段抗體蛋白芯片的制備及評(píng)價(jià)論文何謙，楚雍烈，林聯(lián)成，王香玲，劉余靜【關(guān)鍵詞】肝炎病毒PreparationandevaluationofproteinchipfordifferentHCVantibodydetection【Abstract】AIM:ToprepareandevaluatetheclinicalapplicationofproteinchipfordifferenthepatitisvirusC(HCV)antibodies.METHODS:Proteinchipfordiff
2、erentHCVantibodiesericantigenandthe4segmentsofHCVantigensontheslide.TheresultsofthismethodericantigenaccordedetoRIBA,theaccordancerateentsofHCVantigensa公司）；不同片段抗體標(biāo)準(zhǔn)品由深圳賽爾生物技術(shù)有限公司惠贈(zèng)；RIBA3.0試劑，載玻片（美國(guó)Chiron公司）；抗HCV（ELISA）試劑（上海永華細(xì)胞和基因高技術(shù)分析中心）；血清標(biāo)本99例，均來(lái)源于西安交通大學(xué)第
3、一醫(yī)院和第二醫(yī)院門(mén)診及住院患者.1.2方法1.2.1包被和封閉將融合抗原及各片段抗原配成不同濃度，用點(diǎn)樣儀將其點(diǎn)樣于醛基化玻片上，37℃溫浴2h后晾干.用含100mL/L小牛血清的PBS(0.01mmol/LPBS,pH7.2)37℃封閉2h，晾干放于4℃冰箱過(guò)夜后備用.1.2.2檢測(cè)取出制備好的芯片，加1∶10倍稀釋血清10μL，37℃水浴30min，PBST（0.01mmol/LPBS,pH7.2,.freelL/LTin，PBST洗滌5次后，用ScanArray4000B掃描儀掃描.1.2.3結(jié)果判斷不同
4、片段中有一個(gè)陽(yáng)性判為可疑，兩個(gè)或以上片段陽(yáng)性則判為陽(yáng)性標(biāo)本.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：方法準(zhǔn)確性判斷采用Youden指數(shù)，方法一致性判斷采用Kappa值.2結(jié)果2.1實(shí)驗(yàn)條件選擇用棋盤(pán)滴定法進(jìn)行抗原濃度、樣品稀釋倍數(shù)及CY3抗人IgG結(jié)合物濃度的確定.不同濃度的各片段抗原點(diǎn)樣，測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)品并與RIBA試劑比較，符合率最高者為點(diǎn)樣濃度.結(jié)果以融合抗原100μg/L,C區(qū)抗原100μg/L,NS4抗原50μg/L,NS5抗原50μg/L為最佳.樣品稀釋倍數(shù)以1∶10為宜.CY3抗人IgG結(jié)合物濃度測(cè)定以1∶500為最佳濃度.2.2
5、重復(fù)性和穩(wěn)定性試驗(yàn)將上述包被好的蛋白芯片分別置于4℃冰箱和室溫下貯存7d和1,3,6mo后取出，用上述方法分別檢測(cè)20例陽(yáng)性標(biāo)本和正常對(duì)照，結(jié)果與新鮮包被的蛋白芯片一致.2.3特異性試驗(yàn)取甲肝抗體陽(yáng)性、乙肝表面抗體陽(yáng)性、巨細(xì)胞病毒抗體陽(yáng)性、類風(fēng)濕因子陽(yáng)性血清各20份，用本試劑檢測(cè)，結(jié)果均為陰性.2.4不同丙肝抗原片段Cutoff值（S/n）的確定檢測(cè)407例正常人血清，計(jì)算每種抗原的平均熒光強(qiáng)度，求得信噪比.各片段陰性對(duì)照的信噪比應(yīng)小于2.5.Cutoff值等于各片段陰性對(duì)照平均值加3倍標(biāo)準(zhǔn)差，片段信噪比大于C
6、utoff值時(shí)該片段抗體為陽(yáng)性（Tab1）.表1不同丙肝抗原片段的均值、標(biāo)準(zhǔn)差和Cutoff值（略）2.5考核評(píng)估蛋白芯片各片段檢測(cè)與RIBA確證試劑進(jìn)行比較，結(jié)果見(jiàn)Tab2.表2HCV蛋白芯片與RIBA各區(qū)段抗體檢出比較（略）2.6抗HCV（ELISA）試劑和蛋白芯片法的比較抗HCV（ELISA）試劑檢測(cè)樣本99例，其中陽(yáng)性標(biāo)本69例,陰性30例.30例抗HCVELISA試劑檢出的陰性樣本，蛋白質(zhì)芯片的融合抗原檢測(cè)均為陰性，蛋白質(zhì)芯片的分片段檢測(cè)均為陰性；69例抗HCVELISA試劑檢出的陽(yáng)性樣本，蛋白質(zhì)芯片
7、的融合抗原檢測(cè)檢出陽(yáng)性67例，陰性2例；蛋白芯片分片段檢測(cè)根據(jù)不同片段中有1個(gè)陽(yáng)性判為可疑，2個(gè)或2個(gè)以上陽(yáng)性則判為陽(yáng)性標(biāo)本的判定標(biāo)準(zhǔn)，蛋白質(zhì)芯片的分片段檢測(cè)檢出陽(yáng)性67例，陰性1例，可疑標(biāo)本1例.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，蛋白芯片的融合抗原檢測(cè)與ELISA法相比，陰性符合率為93.8%，陽(yáng)性符合率為97.1%,具有較好的一致性（Kappa值=0.953,P0.05）.蛋白質(zhì)芯片分片段檢測(cè)與ELISA法相比，陰性符合率為96.8%，陽(yáng)性符合率為97.1%，具有較好的一致性（Kappa值=0.954,P0.05）.2.7R
8、IBA試劑和蛋白芯片法的比較RIBA試劑檢測(cè)樣本99例，其中陽(yáng)性標(biāo)本66例,陰性31例，可疑標(biāo)本2例.蛋白質(zhì)芯片的融合抗原檢測(cè)檢出陽(yáng)性67例，陰性32例.蛋白質(zhì)芯片的分片段檢測(cè)檢出陽(yáng)性67例，陰性31例，可疑標(biāo)本1例.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，蛋白芯片的融合抗原檢測(cè)與RIBA法相比，陰性符合率為96.9%,陽(yáng)性符合率為98.5%.具有較好的一致性（Kappa值=0.955,P0.05）.蛋白芯片
