纈沙坦對(duì)糖尿病大鼠心肌血小板源生長(zhǎng)因子b的表達(dá)及心肌纖維化的影響

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1、纈沙坦對(duì)糖尿病大鼠心肌血小板源生長(zhǎng)因子B的表達(dá)及心肌纖維化的影響【摘要】目的探討纈沙坦對(duì)糖尿病(DM)大鼠心肌血小板源生長(zhǎng)因子B（PDGFB）表達(dá)及心肌纖維化的影響。方法32只大鼠分為對(duì)照組、DM未治療組、纈沙坦小劑量治療組（10mg·kg-1·d-1）、纈沙坦大劑量治療組（30mg·kg-1·d1）；12RNA表達(dá)情況。結(jié)果DM未治療組H/B、LVMI增高(P＜0.01)；PDGFB、FN和ColⅢmRNA表達(dá)顯著上調(diào)；纈沙坦干預(yù)12RNA的表達(dá)減少，心肌間質(zhì)CVF降低（均P<0.01）；大小劑量治療組可以減少DM

2、心肌PDGFBmRNA的表達(dá)（P<0.01）。以上效應(yīng)具有劑量依賴性。結(jié)論DM大鼠心肌PDGFB表達(dá)明顯上調(diào)。纈沙坦能減少DM大鼠心肌細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)積聚，改善心肌結(jié)構(gòu)，PDGFB表達(dá)下調(diào)可能是纈沙坦抑制DM心肌纖維化的心臟保護(hù)作用機(jī)制之一?！娟P(guān)鍵詞】纈沙坦；糖尿??；大鼠；心肌病變；血小板源生長(zhǎng)因子B　　1福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院內(nèi)分泌科心肌纖維化是糖尿病心肌病(DC)重要的病理改變，是糖尿病(DM)心臟舒張功能障礙進(jìn)而發(fā)生充血性心力衰竭的主要原因之一〔1〕。血小板源生長(zhǎng)因子B（PDGFB）是一種刺激結(jié)締組織增

3、生的肽類調(diào)節(jié)因子，其在DM并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用而倍受關(guān)注。血管緊張素Ⅱ受體1（AT1受體）拮抗劑(ARB)可通過選擇性地阻斷血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）與AT1受體結(jié)合,延緩DM腎臟纖維化的進(jìn)展，并能阻止或逆轉(zhuǎn)高血壓性心臟病及心肌梗死后的心肌重塑，其作用得益于ARB降壓以外的保護(hù)作用。關(guān)于ARB在DM中的心臟保護(hù)作用及其機(jī)制的研究方興未艾。本研究觀察纈沙坦干預(yù)對(duì)DM大鼠心肌PDGFB表達(dá)以及細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）含量、心肌纖維化的影響，以期為防治DC提出新的思路?！　?材料與方法　　1.1DM大鼠模型的建立和分組　　選擇8周齡

4、體重220～250g雄性SD大鼠（上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供）32只，隨機(jī)分成正常對(duì)照組（N）8只，DM組24只，采用一次性腹腔內(nèi)注射1%鏈脲佐菌素（STZ,Sigma公司，55mg/kg），72h后尾靜脈采血用血糖儀（Roche公司）測(cè)定血糖，≥16.7mmol/L者確定為DM模型，N組注射等量的枸櫞酸緩沖液。DM組成模后，隨機(jī)分為DM未治療組（D）、纈沙坦小、大劑量（10、30mg·kg-1·d-1）治療組（Dval1、Dval2）各8只。纈沙坦由北京諾華制藥有限公司提供。Dval1組、Dval2組每日灌胃給藥1次，D組、N

5、組予等量蒸餾水灌胃，共12in，離心，分離上清-70℃保存。AngⅡ濃度測(cè)定采用125IAngⅡ標(biāo)記的放射免疫分析，以SN682B3型放射免疫γ計(jì)數(shù)器記錄結(jié)果。血漿、心肌AngⅡ濃度分別用pg/ml和pg/100mg作單位。本試劑盒測(cè)定范圍10～2000pg/ml,批內(nèi)變異系數(shù)CVm處，取左室心肌橫切面。用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，制片，切片厚約6μm。飽和苦味酸天狼星紅染色法使膠原特殊染色，心肌細(xì)胞呈黃色，膠原呈紅色。光學(xué)顯微鏡下觀察心肌切片膠原沉積的情況，并予拍照記錄。于心?。ú话ㄐ?dòng)脈）及心肌小動(dòng)脈周圍分別隨機(jī)選

6、取5個(gè)視野，Moticimagesadvanced3.0圖像分析系統(tǒng)（麥克奧迪公司）測(cè)量每個(gè)視野下心室膠原面積和統(tǒng)計(jì)場(chǎng)總面積，兩者比值即為CVF?！　?.2.5RTPCR檢測(cè)大鼠心肌PDGFB、纖維連接蛋白（FN）、Ⅲ型膠原（ColⅢ）mRNA的表達(dá)　　以VectorNTI5.5軟件設(shè)計(jì)各基因PCR引物，由中科院開瑞公司合成。引物的核苷酸序列和擴(kuò)增產(chǎn)物大小為：PDGFB,5′ACGCGTACAGAGGTGTTCCAG3′和5′GGGTCACTGTGGCCTTCTTG3′,219bp；纖維連接蛋白(FN)，5′TGCT

7、GGGACTTCCTACGTCG3′和5′CGTTTGAGTTGCCACCGTAAG3′,496bp；ColⅢ,5′GGAGGAATGGGTGGCTATCC3′和5′TGTCCTGGAGAGCCATTTGAG3′,601bp；βactin,5′CGGCATTGTAACCAACTGGG3′和5′CCTCTCAGCTGTGGTGGTGA3′,400bp。RTPCR條件均為:逆轉(zhuǎn)錄55℃30min；預(yù)變性94℃3min；擴(kuò)增反應(yīng)運(yùn)行30個(gè)循環(huán),94℃30s，55℃1min，72℃1min；延伸72℃7min。PC

8、R產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳,利用凝膠成像系統(tǒng)(BIORAD公司)進(jìn)行照相和吸光度掃描。目的基因表達(dá)水平以其吸光度與內(nèi)參照βactin吸光度的比值表示?！　?.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理　　計(jì)量資料以x±s表示，組間差異比較采用t檢驗(yàn)或AN