纈沙坦對糖尿病大鼠心肌血小板源生長因子b的表達

《纈沙坦對糖尿病大鼠心肌血小板源生長因子b的表達》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在工程資料-天天文庫。

1、纈沙坦對糖尿病大鼠心肌血小板源生長因子B的表達【摘要】目的探討纈沙坦對糖尿病(DM)大鼠心肌血小板源生長因子B（PDGFB）表達及心肌纖維化的影響。方法32只大鼠分為對照組、DM未治療組、纈沙坦小劑量治療組（10mg·kg-1·d-1）、纈沙坦大劑量治療組（30mg·kg-1·d1）；12RNA表達情況。結果DM未治療組H/B、LVMI增高(P＜0.01)；PDGFB、FN和ColⅢmRNA表達顯著上調；纈沙坦干預12RNA的表達減少，心肌間質CVF降低（均P<0.01）；大小劑量治療組可

2、以減少DM心肌PDGFBmRNA的表達（P<0.01）。以上效應具有劑量依賴性。結論DM大鼠心肌PDGFB表達明顯上調。纈沙坦能減少DM大鼠心肌細胞外基質(ECM)積聚，改善心肌結構，PDGFB表達下調可能是纈沙坦抑制DM心肌纖維化的心臟保護作用機制之一。【關鍵詞】纈沙坦；糖尿病；大鼠；心肌病變；血小板源生長因子B　　1福建醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院內分泌科心肌纖維化是糖尿病心肌病(DC)重要的病理改變，是糖尿病(DM)心臟舒張功能障礙進而發(fā)生充血性心力衰竭的主要原因之一〔1〕。血小板源生長因子

3、B（PDGFB）是一種刺激結締組織增生的肽類調節(jié)因子，其在DM并發(fā)癥的發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用而倍受關注。血管緊張素Ⅱ受體1（AT1受體）拮抗劑(ARB)可通過選擇性地阻斷血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）與AT1受體結合,延緩DM腎臟纖維化的進展，并能阻止或逆轉高血壓性心臟病及心肌梗死后的心肌重塑，其作用得益于ARB降壓以外的保護作用。關于ARB在DM中的心臟保護作用及其機制的研究方興未艾。本研究觀察纈沙坦干預對DM大鼠心肌PDGFB表達以及細胞外基質（ECM）含量、心肌纖維化的影響，以期為防治DC提出新的思路

4、?！　?材料與方法　　1.1DM大鼠模型的建立和分組　　選擇8周齡體重220～250g雄性SD大鼠（上海斯萊克實驗動物有限公司提供）32只，隨機分成正常對照組（N）8只，DM組24只，采用一次性腹腔內注射1%鏈脲佐菌素（STZ,Sigma公司，55mg/kg），72h后尾靜脈采血用血糖儀（Roche公司）測定血糖，≥16.7mmol/L者確定為DM模型，N組注射等量的枸櫞酸緩沖液。DM組成模后，隨機分為DM未治療組（D）、纈沙坦小、大劑量（10、30mg·kg-1·d-1）治療組（Dval1、Dval2）

5、各8只。纈沙坦由北京諾華制藥有限公司提供。Dval1組、Dval2組每日灌胃給藥1次，D組、N組予等量蒸餾水灌胃，共12in，離心，分離上清-70℃保存。AngⅡ濃度測定采用125IAngⅡ標記的放射免疫分析，以SN682B3型放射免疫γ計數器記錄結果。血漿、心肌AngⅡ濃度分別用pg/ml和pg/100mg作單位。本試劑盒測定范圍10～2000pg/ml,批內變異系數CVm處，取左室心肌橫切面。用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，制片，切片厚約6μm。飽和苦味酸天狼星紅染色法使膠原特殊染色，心肌細胞

6、呈黃色，膠原呈紅色。光學顯微鏡下觀察心肌切片膠原沉積的情況，并予拍照記錄。于心?。ú话ㄐ用}）及心肌小動脈周圍分別隨機選取5個視野，Moticimagesadvanced3.0圖像分析系統(tǒng)（麥克奧迪公司）測量每個視野下心室膠原面積和統(tǒng)計場總面積，兩者比值即為CVF?！　?.2.5RTPCR檢測大鼠心肌PDGFB、纖維連接蛋白（FN）、Ⅲ型膠原（ColⅢ）mRNA的表達　　以VectorNTI5.5軟件設計各基因PCR引物，由中科院開瑞公司合成。引物的核苷酸序列和擴增產物大小為：PDGFB,5′A

7、CGCGTACAGAGGTGTTCCAG3′和5′GGGTCACTGTGGCCTTCTTG3′,219bp；纖維連接蛋白(FN)，5′TGCTGGGACTTCCTACGTCG3′和5′CGTTTGAGTTGCCACCGTAAG3′,496bp；ColⅢ,5′GGAGGAATGGGTGGCTATCC3′和5′TGTCCTGGAGAGCCATTTGAG3′,601bp；βactin,5′CGGCATTGTAACCAACTGGG3′和5′CCTCTCAGCTGTGGTGGTGA3

8、′,400bp。RTPCR條件均為:逆轉錄55℃30min；預變性94℃3min；擴增反應運行30個循環(huán),94℃30s，55℃1min，72℃1min；延伸72℃7min。PCR產物在2%瓊脂糖凝膠上進行電泳,利用凝膠成像系統(tǒng)(BIORAD公司)進行照相和吸光度掃描。目的基因表達水平以其吸光度與內參照βactin吸光度的比值表示?！　?.3統(tǒng)計學處理　　計量資料以x±s表示，組間差異比較采用t檢驗或ANOVA檢驗，組間兩