腦康靈口服液對偏頭痛大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響

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1、腦康靈口服液對偏頭痛大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響作者:李新田,邱財(cái)榮,林昱,邱瑾【摘要】目的研究腦康靈口服液對偏頭痛大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響。方法采用硝酸甘油偏頭痛模型大鼠,運(yùn)用透射電鏡和流式細(xì)胞儀技術(shù)進(jìn)行研究。結(jié)果腦康靈口服液可改善硝酸甘油型偏頭痛大鼠神經(jīng)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)異常,降低總體細(xì)胞凋亡發(fā)生率和神經(jīng)細(xì)胞凋亡百分率。結(jié)論說明腦康靈口服液對硝酸甘油型偏頭痛大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡具有抑制作用?!娟P(guān)鍵詞】腦康靈口服液;偏頭痛;細(xì)胞凋亡;大鼠【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectsofNaokanglingoralliquidonnerve

2、cellapoptosisofmigrainemodelrat.MethodsTochoosediseasemodelofmigraneeansoffloetryandtransmissionelectronmicroscope.ResultsNaokanglingoralliquidcanadjusttheabnormalultramicro-structureofnervecellofmigrainemodelrats,decreasetheincidenceandtheapoptosispercentage.ConclusionNaokangli

3、ngoralliquidcanblockthenervecellapoptpsisofmigrainemodelrat.【Keyigraine;apoptosis;rat腦康靈口服液是由天麻、當(dāng)歸、川芎、丹參、地龍、鉤藤等組成,臨床用于治療顱腦外傷引起的頭痛、頭暈、惡心、嘔吐等。目前,國內(nèi)外學(xué)者對偏頭痛發(fā)病機(jī)制分別從血管、神經(jīng)、免疫、基因表達(dá)及微量元素等方面進(jìn)行了研究,取得了可喜的成果,但有些問題還需要進(jìn)一步探討。為此,本文采用透射電鏡和流式細(xì)胞儀技術(shù)在腦康靈口服液(naokanglingoralliquid,NKL)對硝酸甘油型偏頭痛大鼠神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)

4、學(xué)、凋亡情況、凋亡率及凋亡峰等方面的影響進(jìn)行了研究。1材料1.1藥物NKL口服液,由本院藥劑科提供。麥角胺咖啡因片(cafergot,CFG),每片含酒石酸麥角胺1mg(由上海信誼藥業(yè)有限公司生產(chǎn),生產(chǎn)批號:000401)。硝酸甘油注射液(nitroglycerininjection,NTG)每1ml含硝酸甘油5mg(由廣州明興制藥廠生產(chǎn),生產(chǎn)批號:000505)。實(shí)驗(yàn)時用注射用水配制成所需濃度。1.2試劑碘化丙啶(PI),Sigma公司;RNAseA,QIAGEM公司;TritoX-100,E.MERCK公司;其余試劑均為市售分析純。1.3儀器LKB

5、Ⅲ型超薄切片機(jī)(瑞典);日立H-600型透射電鏡(日本);COULTERESP型流式細(xì)胞儀(美國)。1.4動物SD大鼠,體重250~280g,由西安醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供(醫(yī)動字第8-005號)。2方法2.1樣品制備取健康SD大鼠48只,雌雄各半。隨機(jī)分為6組,即正常組、模型組、CFG組、NKL3個劑量組,每組8只。參照Cristina、Tassorelli等[1,2]報(bào)道的方法,復(fù)制硝酸甘油型SD大鼠偏頭痛動物模型。除正常組外,其余各組動物sc硝酸甘油注射液10mg/kg。造模30min后按每組ig給藥。正常組不作處理,模型組ig注射用水10ml/

6、kg,CFG組igCFG藥液10ml/kg,NKL3個劑量組分別ig相應(yīng)濃度的NKL藥液10ml/kg。造模4h每只大鼠ip40mg/kg戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉。盡量放血,斷頭,剪開顱骨,取出腦組織,除去腦膜和血管。每只大鼠均取同一部位的腦組織塊(大腦皮層部位),備用。2.2凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察[3]取健康SD大鼠36只,雌雄各半,隨機(jī)分為6組,每組6只。樣品制備方法同2.1。將取材的新鮮腦組織塊,加入3%戊二醛中,固定30min,用0.1mmol/LPBS漂洗,1%鋨酸溶液固定30min,梯度丙酮脫水,環(huán)氧樹脂Epon812滲透包埋,70℃過夜聚合;LKB

7、Ⅲ型超薄切片機(jī)切片,切片厚度為60nm;醋酸雙氧鈾—枸櫞酸鉛雙重染色;日立H-600型透射電鏡觀察攝影。觀察區(qū)域有暗細(xì)胞(系凋亡前細(xì)胞)、凋亡細(xì)胞和凋亡小體者,均屬于大腦皮層神經(jīng)元發(fā)生凋亡。記錄神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生凋亡的動物例數(shù),并對各實(shí)驗(yàn)組動物神經(jīng)細(xì)胞凋亡發(fā)生率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。質(zhì)反應(yīng)資料采用χ2檢驗(yàn)分析,其中,χ2>6.635時,P<0.01;χ2>3.841時,P<0.05;χ2<3.841時,P>0.05。實(shí)驗(yàn)結(jié)果由正常組與模型組比較、給藥組與模型組比較中得出。2.3凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)[4]取健康SD大鼠48只,雌雄各半,隨機(jī)分為6

8、組,每組8只。樣品制備方法同2.1項(xiàng)。將取材的新鮮腦組織塊用PBS液漂洗,用剪刀剪碎成1mm3

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