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《膿毒癥急性肺損傷大鼠肺組織的細(xì)胞凋亡》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、膿毒癥急性肺損傷大鼠肺組織的細(xì)胞凋亡作者：徐笑益方向明鮑軍明石卓顧偉忠【關(guān)鍵詞】脫噬作用；膿毒癥；肺損傷[摘要]目的觀察膿毒癥急性肺損傷（ALI）大鼠肺組織的細(xì)胞凋亡。方法24只SPF級SD大鼠采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)（CLP）復(fù)制膿毒癥模型，分別于CLP后0、12、36和72h頸椎脫臼法處死大鼠，取肺組織。行肺組織HE染色，觀察病理變化，以透射電鏡、TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡。結(jié)果HE染色可見，CLP后12、36、72h肺泡間隔增寬，間質(zhì)充血水腫，肺泡腔變窄，炎癥細(xì)胞滲出。TUNEL法檢測發(fā)現(xiàn)，CLP后12、36、72h肺組織內(nèi)細(xì)胞凋亡指數(shù)（AI）增加，其中36hAI值最高（
2、p<0.01）。透射電鏡證實細(xì)胞凋亡的特征性改變。結(jié)論膿毒癥大鼠肺組織的AI明顯增加，細(xì)胞凋亡可能在膿毒癥ALI發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。[關(guān)鍵詞]：脫噬作用；膿毒癥；肺損傷[Abstract]ObjectiveToinvestigatethepulmonaryapoptosisofacutelunginjury(ALI)insepsis.Methods24S-Dratsedcecalligationandpuncture(CLP)toinducesepsis.Atthetimeof0,12,36and72hoursafterCLP,theratsatoxylin
3、andeosin(H(E)stain.ApoptosisinedbyTUNELtest(Terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediateddUTPnickendlabeling)andelectronmicroscope.ResultsAt12,36,72hoursfolloaoccurredassiveinfiltrationoftheinflammatorycell,andthepulmonaryarchitectureaged.Electronmicroscopedemonstratedcharacteristicfindin
4、gsofapoptosis.TUNELtestshoorepositivecellsat12,36,and72hrsparedayplayanimportantroleinthedevelopmentofALI.【Key切口，在距離盲腸盲端1~2cm處以1號線結(jié)扎，用18號穿刺針在結(jié)扎處遠(yuǎn)端穿刺盲腸兩次，為防止針孔閉合，將1/4長的18號穿刺針外套管貫通盲腸，并用1號線將外套管牢固固定于腸壁。盲腸還納入腹腔，關(guān)腹。3標(biāo)本采集和處理分別于CLP后0h、12h、36h、72h頸椎脫臼法處死大鼠，立即將肺取出。4檢測指標(biāo)（1）形態(tài)學(xué)觀察HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察肺組織病理變化
5、；醋酸鈾－枸櫞酸鉛雙重染色，TEA10電鏡觀察細(xì)胞凋亡。（2）末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記法（TUNEL法）肺組織以10％福爾馬林固定6~24小時后，切成4μm厚的石蠟切片。石蠟切片按原位細(xì)胞凋亡試劑盒（試劑盒購自Roche公司，顯色劑AP-red購自北京中山生物技術(shù)有限公司）提供的方法操作，光學(xué)顯微鏡下觀察并計數(shù)。5統(tǒng)計學(xué)分析數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(((s）表示，用SPSS11.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析處理。采用單因素方差分析（One-WayANOVA）對數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，P<0.05為差異具有顯著性意義。結(jié)果1病理組織學(xué)觀察肺組織HE染色可見CL
6、P后12h肺泡間隔增寬,炎癥細(xì)胞滲出，以中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞為主，肺泡腔狹窄。36、72h肺組織病理學(xué)改變加重，肺泡間隔明顯充血、增寬，大量炎癥細(xì)胞滲出，肺泡腔明顯狹窄，有時可見肺實變。2透射電鏡TEA10電鏡下可見CLP后12、36、72h凋亡細(xì)胞染色質(zhì)濃集，邊聚，核固縮，胞膜完整，有時可見凋亡小體，肺泡上皮細(xì)胞板層小體排空現(xiàn)象增多，出現(xiàn)大量空泡。3TUNEL檢測結(jié)果光學(xué)顯微鏡下觀察，凋亡陽性細(xì)胞核呈紅色著染。同一切片隨機(jī)取5個高倍鏡視野(×400)，計算細(xì)胞中平均陽性細(xì)胞的凋亡指數(shù)（ApoptosisIndex，AI）[3]?？梢奀LP后12、36、72hAI均比0
7、h高（P<0.01），其中36h的AI最高，隨CLP時間延長AI呈先增加后降低的趨勢。不同時間點肺組織的AI見表1。凋亡細(xì)胞包括肺泡上皮細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞。表1：大鼠CLP后肺組織內(nèi)AI的比較注：各時間點與0h比較：*P<0.01討論膿毒癥是引起ALI最常見的病因，利用盲腸結(jié)扎穿孔復(fù)制膿毒癥自70年代起就已應(yīng)用于動物實驗研究中，這一模型與臨床上常見的腸穿孔引起的腹膜炎較為接近，有較高的研究價值，其發(fā)生、發(fā)展的機(jī)理主要是腹腔內(nèi)病原微生物入侵、感染后，機(jī)體過度產(chǎn)生炎性分子，使肺組織中的上皮細(xì)胞、
