正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選黃芩中黃芩素提取工藝論文

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1、正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選黃芩中黃芩素提取工藝論文【摘要】目的優(yōu)選黃芩中黃芩素的提取工藝。方法通過正交實(shí)驗(yàn)以黃芩素作為指標(biāo)考察4個(gè)因素（溶劑類型，提取時(shí)間，提取方法，提取次數(shù)）、3個(gè)水平對(duì)提取效果的影響，以反相高效液相色譜（RPHPLC）法測定黃芩素的含量。結(jié)果黃芩素的最佳提取工藝為A2B1C2D3，即采用冷浸法，用水作為提取溶劑，提取90min.freelizetheextractconditionsforbaicaleinofScutellariabaicalensis.MethodsTheorthogonaldesigne,extractingmethodsandextractin

2、gtimesinedbyRPHPLC.ResultsTheoptimumextractingconditionsaceration,.freelinandtotallyfor4times.ConclusionThesolventsgreatlyinfluencedtheextractionofbaicalein.Theextracttechnologyofbaicaleinisfeasibleandreasonable.KeyasilC18柱，流動(dòng)相為甲醇－水(65∶35，含0.6%三乙胺，加磷酸調(diào)pH2.6)；檢測波長275nm；柱溫為室溫；流速l.0ml/min。在該色

3、譜條件下，黃芩素與其他成分有較好分離，見圖1。2.2正交設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)選用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)表，以黃芩素含量為指標(biāo)，選取提取方法、溶劑、提取時(shí)間、提取次數(shù)對(duì)其影響。因素水平見表1。表1因素水平（略）2.3對(duì)照品溶液的制備精密稱取黃芩素對(duì)照品0.90mg，先用甲醇定溶至5ml，后取0.5ml加甲醇定溶于10ml容量瓶中，即得0.009mg/ml的對(duì)照品貯備液。2.4供試品溶液的制備取干燥黃芩粗品，粉碎后過14目篩，每次精密稱取5g，根據(jù)正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行提取，提取物先用甲醇定容置100ml容量瓶中，然后取0.1ml用甲醇稀釋置10ml容量瓶中，用0.45μm微孔濾膜過濾,取續(xù)

4、濾液，作為供試品溶液。2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備取黃芩素對(duì)照品貯備液制成濃度分別為0.675，0.900，2.250，4.500，6.75，9.000μg/ml，進(jìn)樣20μl。以峰面積為橫坐標(biāo)，黃芩素濃度（μg/ml）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得方程為：Y=0.0144X+0.2696，r=0.9994。結(jié)果表明在0.675～9.000μg/ml范圍內(nèi)，黃芩素濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，其色譜圖見圖1。2.6穩(wěn)定性考察吸取4號(hào)樣品液和對(duì)照品溶液分別于0，2，4，6，8，10h進(jìn)樣20μl，得樣品液峰面積RSD=2.56%(n=6)，對(duì)照品溶液峰面積的RSD=2.45%(n=6)，表

5、明樣品及對(duì)照品在10h內(nèi)穩(wěn)定性較好。2.7正交實(shí)驗(yàn)及結(jié)果分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過正交實(shí)驗(yàn)提取及含量測定后，直觀分析結(jié)果（見表2）表明：影響黃芩中黃芩素提取的主要因素為B（溶劑），其次是D（提取次數(shù)），由計(jì)算得出其最佳提取工藝為A2B1C2D3，即采用冷浸法，用水作為提取溶劑，提取90min，共提取4次。表2正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（略）2.8最佳工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)按照正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選出的黃芩最佳提取工藝，對(duì)黃芩中黃芩素的提取進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)考察。黃芩素提取率平均為5.12%（n=3），與正交實(shí)驗(yàn)最大值接近，方法可行。3討論通過采用甲醇水、甲醇0.2%磷酸、甲醇0.6%磷酸、甲醇水（含0.6%三乙胺，加

6、磷酸調(diào)pH）等不同溶劑系統(tǒng)及不同比例為流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)，確定流動(dòng)相為甲醇水(65∶35，含0.6%三乙胺，加磷酸調(diào)pH＝2.6)，樣品峰能得到了較好的分離。黃芩素為黃酮類化合物，其結(jié)構(gòu)中具有鄰三酚羥基，易被氧化成對(duì)醌結(jié)構(gòu)，所以對(duì)照品溶液通常要冰箱保存，并且在一定時(shí)間內(nèi)盡快操作。由本研究結(jié)果可知，溶劑的類型對(duì)黃芩素的提取影響最大，從其結(jié)構(gòu)分析和溶解度實(shí)驗(yàn)來看，雖然黃芩素水溶性不大，但蒸餾水比其他溶劑的提取率都高，其原因可能是一部分黃酮苷類發(fā)生水解生成了黃芩素，尤其非加熱方法（超聲法和冷浸法），使得植物體內(nèi)原存的水解黃芩苷等的葡萄糖醛酸酶能較好地發(fā)揮水解作用。筆者也進(jìn)行了冷浸法用

7、水作為溶劑、提取120min、提取4次（實(shí)驗(yàn)Ⅰ）及冷浸法用水作為溶劑、提取90min、提取5次的實(shí)驗(yàn)（實(shí)驗(yàn)Ⅱ）。采用實(shí)驗(yàn)Ⅰ和Ⅱ中的提取工藝，結(jié)果黃芩素的提取率分別為4.90%（n=3）和5.11%（n=3）,故采用本正交實(shí)驗(yàn)所確定的提取工藝合理、經(jīng)濟(jì)適用。【