資源描述：
《大薊總黃酮誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡作用的研究論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、大薊總黃酮誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡作用的研究論文劉素君，郭紅，潘明，楊志榮，張杰【摘要】目的研究大薊總黃酮對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的影響。方法用不同濃度的大薊總黃酮對(duì)人肝癌SMMC-7721和人子宮癌細(xì)胞Hela進(jìn)行處理，MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性，再用瓊脂糖凝膠電泳觀察DNA“梯子”(Ladder)和DAPI染色觀察凋亡小體。結(jié)果大薊總黃酮對(duì)SMMC-7721的半數(shù)致死量(IC50)為93.64μg/ml；對(duì)Hela細(xì)胞的半數(shù)致死量(IC50)為85.12μg/ml。可見清晰的“梯子”狀DNA帶紋和凋亡小體。結(jié)論大薊總黃酮能誘導(dǎo)癌細(xì)胞的凋亡，從而達(dá)到抗腫瘤的作用?！娟P(guān)鍵詞】大薊總黃酮抗腫瘤細(xì)胞凋亡大薊為菊科管狀
2、花亞科菜薊族薊屬植物CirsiumjaponicumDC.的干燥地上部分或根［1］.freel，莖直立，密被白毛，葉互生；葉片倒卵狀長(zhǎng)橢圓形，邊緣具淺裂和斜刺，被毛；5～6月開花，頭狀花序頂生，花單生，紫紅色，瘦果扁橢圓形，生于山野路邊，以全草和根入藥，我國(guó)大部分地區(qū)有分布。全草灰綠色，大薊性涼，味甘、苦,歸心、肝經(jīng)，功效為涼血止血、祛瘀止痛，主治吐血、衄血、尿血、血淋、血崩、帶下、腸風(fēng)、腸癰、癰瘍腫毒、疔瘡、高血壓及肝炎等。其化學(xué)成分復(fù)雜，主要含有黃酮、黃酮苷，揮發(fā)油、三萜和甾醇等物質(zhì)。大薊在民間驗(yàn)方多用于治療癌癥，如：大薊根、三白草根治肝癌；鮮大薊葉與雞蛋清攪拌后貼于患處，可治乳腺癌等
3、。大薊的主要成分為黃酮類化合物，文獻(xiàn)報(bào)道其多聚乙炔具有抗腫瘤作用［2］。其總黃酮在體內(nèi)有抗腫瘤作用并能提高腫瘤小鼠的免疫功能［3］。但總黃酮對(duì)腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡的作用還沒有研究，本文就其對(duì)腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡的作用進(jìn)行初步探索。1材料與儀器1.1瘤株SMMC-7721和Hela細(xì)胞株，購(gòu)自上海細(xì)胞生物學(xué)研究所。藥物：大薊由成都中藥材公司提供。1.2試劑RPMI1640培養(yǎng)基、胎牛血清(FBS)為GIBCO公司產(chǎn)品，染料碘化丙啶(PI)、胰蛋白酶均為Sigma公司產(chǎn)品，四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)購(gòu)自上海普飛生物技術(shù)有限公司。1.3儀器酶標(biāo)儀（Bio-Rad，Model3550），離心機(jī)（北京醫(yī)用離心
4、機(jī)廠，LDZ5-2），倒置顯微鏡（NikonDEAPHOTFx-35DX）。1.4大薊總黃酮的制備大薊總黃酮由本室制備。將大薊70%乙醇提取物與硅藻土拌樣揮干后,裝入玻璃管柱中,用石油醚流洗,去除其中的葉綠素和極性較小的成分;流洗結(jié)束后倒出硅藻土化合物,揮干溶劑重新裝入玻璃管柱,正丁醇流洗提取,用1%三氯化鋁乙醇溶液與黃酮類化合物在濾紙上顯色后，在紫外燈下觀察有無黃綠色熒光的方法檢測(cè)監(jiān)控,提取至流洗液無黃酮反應(yīng)時(shí)結(jié)束;將正丁醇提取液濃縮后揮干溶劑,用少量95%的乙醇溶解后上聚酰胺樹脂柱,依次用水和95%的乙醇洗脫,收集95%的乙醇洗脫液,洗脫至檢測(cè)無黃酮反應(yīng)時(shí)結(jié)束;濃縮95%的乙醇洗脫液,
5、.freelg不同濃度的大薊黃酮提取液各10μl,3復(fù)孔，置于飽和濕度、37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h,然后每孔加入10μl5mg/ml的MTT溶液（用生理鹽水配制）繼續(xù)培養(yǎng)4h，仔細(xì)吸去上清液，每孔加入二甲基亞砜150μl。1h后，在570nm波長(zhǎng)處用酶標(biāo)儀測(cè)OD值。重復(fù)3次并計(jì)算抑制率。抑制率(IC)=(對(duì)照組OD值-實(shí)驗(yàn)組OD值)/對(duì)照組OD值×100%。2.2DAPI染色的染色體DNA的形態(tài)分別收集大薊總黃酮處理細(xì)胞和未用藥的細(xì)胞用定色劑（甲醇∶乙酸為3∶1）染色10min，10min后用PBS沖洗，細(xì)胞再用DAPI液（1μg溶解在1mlPBS中），然后用固定液固定，染色體D
6、NA的形態(tài)在熒光顯微鏡下觀察。2．3DNA瓊脂糖凝膠電泳分別收集大薊總黃酮和順鉑處理細(xì)胞1×105個(gè)，按酚、氯仿、異戊醇抽提，乙醇沉淀等常規(guī)方法提取細(xì)胞總DNA，2％瓊脂糖凝膠電泳，紫外透射儀上觀察DNA條帶。3結(jié)果3.1MTT法測(cè)試結(jié)果用劑量12.5～200μg/mg的大薊總黃酮處理SMMC-7721和Hela細(xì)胞48h后，MTT法測(cè)定大薊黃酮對(duì)癌細(xì)胞的抑制作用（見圖1）。從圖1可以看到，對(duì)SMMC-7721和Hela細(xì)胞的IC50分別為93.64μg/ml和85.12μg/ml，同空白對(duì)照組比較差異極顯著（P0.01）。當(dāng)用劑量12.5～200μg/mg的大薊黃酮處理SMMC-7721
7、和Hela細(xì)胞1，2d或3d后，對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)（見圖2），從圖2可以看到，活細(xì)胞數(shù)隨著大薊黃酮濃度的增加而減少。研究結(jié)果表明大薊黃酮對(duì)SMMC-7721和Hela細(xì)胞的抑制呈劑量和時(shí)間依賴性。用大薊黃酮處理時(shí)間越長(zhǎng)或劑量越大，對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制效果就越明顯。3.2瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果見圖3，從DNA電泳圖（圖3）上可以看到，癌細(xì)胞經(jīng)100μl/ml的大薊總黃酮處理培養(yǎng)72h后，出現(xiàn)大小約為180～200b
