正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選當(dāng)歸補(bǔ)血湯提取工藝的研究論文

正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選當(dāng)歸補(bǔ)血湯提取工藝的研究論文

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1、正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選當(dāng)歸補(bǔ)血湯提取工藝的研究論文【摘要】目的優(yōu)選當(dāng)歸補(bǔ)血湯的最佳提取工藝條件。方法以當(dāng)歸補(bǔ)血湯中阿魏酸含量為指標(biāo),對(duì)影響提取的重要因素A提取時(shí)間,B加水量,C提取次數(shù)進(jìn)行L9(34)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。結(jié)果最佳提取工藝為藥材加12倍量水,提取兩次,提取2h/次。結(jié)論優(yōu)選得到的提取工藝穩(wěn)定可行?!娟P(guān)鍵詞】當(dāng)歸補(bǔ)血湯阿魏酸正交實(shí)驗(yàn)Abstract:ObjectiveTostudythebestextractionprocessofTangkueiBlood-supplementingdecoction.MethodsUsingtheorthogonaldesignoun

2、tofes,extractedhour)and3levelstodeterminethecontentofferulicacidastheindexofevaluation.ResultsTheoptimumconditionsfortheextractionofferulicacidesofelasted2hours.ConclusionTheextractionprocessforferulicacidfromTangkueiBlood-supplementingdecoctionentingdecoction;Ferulicacid;Orthogonaldesig

3、n當(dāng)歸補(bǔ)血湯出自李東垣《內(nèi)外傷辨惑論》。該方由當(dāng)歸、黃芪兩味藥按1∶5的比例組成,是經(jīng)典的氣血雙補(bǔ)名方,主治勞倦內(nèi)傷、氣弱血虛、陽(yáng)浮外越、婦人經(jīng)行、產(chǎn)后血虛發(fā)熱頭痛,以及瘡瘍潰后久不愈合等癥。阿魏酸是中藥當(dāng)歸中的主要有效成分之一.freelmit高效液相色譜儀系列(P680型四元低壓梯度泵,UVD170U型紫外檢測(cè)器,CHROMELEON6.60色譜工作站);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE52-99(上海亞榮生化儀器廠);TDL80-2B臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);BP211D電子分析天平(德國(guó)sartorius公司)。1.2藥品與試劑阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品,購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所,批

4、號(hào):0773-9910;黃芪(產(chǎn)地內(nèi)蒙古)、當(dāng)歸(產(chǎn)地甘肅)飲片均購(gòu)自南京市藥業(yè)股份有限公司。甲醇(色譜純),乙腈(色譜純),純凈水,其余試劑均為分析純。2方法2.1正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)根據(jù)傳統(tǒng)湯劑的提取方法以及藥材所含成分的理化性質(zhì)的需要,.freell的棕色容量瓶?jī)?nèi),加入冰醋酸0.5ml,加蒸餾水定容至刻度,搖勻,定容,即得樣品溶液。2.3阿魏酸含量測(cè)定方法2.3.1色譜條件色譜柱:KromasilC18(150mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相:甲醇0.5%冰醋酸水溶液(35∶65);流速:0.8ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng):322nm;柱溫:40℃。2.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

5、取干燥恒重的阿魏酸對(duì)照品適量,精密稱定,加水溶解,稀釋制成不同濃度溶液,各精密吸取20μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo),峰面積積分值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算回歸方程為y=8.7963x+1.0913,r=0.9994。結(jié)果表明在2.908~23.264μg/ml范圍內(nèi)阿魏酸的濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。2.3.3樣品溶液的預(yù)處理及測(cè)定采用甲醇沉淀法,取樣品溶液10ml,置50ml棕色容量瓶中,加甲醇定容至刻度;精密吸取定容后溶液10ml,3000r/min離心10min;取上清液,0.22μm微孔濾膜濾過(guò),精密吸取20μl注入液相色譜儀,測(cè)定,

6、即得。結(jié)果見(jiàn)表2。表2正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果(略)2.3.4回收率實(shí)驗(yàn)采用加樣回收法,取已知阿魏酸濃度(10.768μg/ml)的樣品溶液5份,分別加入精密稱定的適量阿魏酸對(duì)照品,測(cè)定,結(jié)果平均回收率為97.63%,RSD為2.27%。2.3.5精密度實(shí)驗(yàn)取濃度為13.456μg/ml對(duì)照品溶液,按含量測(cè)定項(xiàng)下方法,重復(fù)測(cè)定6次,記錄峰面積值,結(jié)果RSD為0.85%,表明本法精密度良好。2.3.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取已知阿魏酸濃度(10.768μg/ml)的樣品,于室溫下放置,分別于0,2,4,6,8h按2.3.3項(xiàng)下方法處理測(cè)定。結(jié)果RSD為2.85%,表明本溶液8h內(nèi)穩(wěn)定性符合要求。

7、2.3.7驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)根據(jù)篩選得到的最佳工藝提取3批樣品,測(cè)定阿魏酸含量。3結(jié)果3.1正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2,利用STATISTICA軟件對(duì)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果作方差分析,所得方差分析結(jié)果見(jiàn)表3。表3方差分析(略)直觀分析結(jié)果表明,在所考察的影響因素中,重要性依次為ACB。A因素中A3A2A1;B因素中B3B1B2;C因素中C2C3C1。方差分析結(jié)果表明:A因素、C因素的影響具有顯著性意義(P0.05);B因素的影響無(wú)顯著性意義(P0.05)。因此,確定最佳提取條件為A3B3C2,即加12倍量水,提取2次,2h/次。3.2驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果根據(jù)篩選

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