同種異體心臟移植急性排斥反應(yīng)的無創(chuàng)監(jiān)測

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1、同種異體心臟移植急性排斥反應(yīng)的無創(chuàng)監(jiān)測作者：馬濤，胡軍，蔡振杰，李彤，王曉武，程亮【摘要】目的:觀察同種異體心臟移植術(shù)后血清C反應(yīng)蛋白（CRP）的動態(tài)變化，探討監(jiān)測其血清濃度水平在評價移植成活質(zhì)量及判斷心臟排斥反應(yīng)的作用.并研究體外單項混合淋巴細胞培養(yǎng)作為無創(chuàng)心臟移植排斥反應(yīng)監(jiān)測方法及意義.方法:26例原位心臟移植患者手術(shù)前后及心內(nèi)膜心肌活檢（EMB）時同期監(jiān)測受體血清CRP濃度水平，依術(shù)后30d內(nèi)受體是否成活分為成活組（n=24）與死亡組（n=2）；依EMB標本（n=32）病理等級（ISHLT）分為陰性組（0，1a,n=24）和排斥組（1b，＞1b，n=

2、8）.通過改良的單向混合淋巴細胞培養(yǎng)與心肌內(nèi)膜活檢(EMB)相對照，測定淋巴細胞活性與心肌活檢病理等級的相關(guān)性.結(jié)果:CRP值在移植早期隨著手術(shù)創(chuàng)傷的恢復(fù)而降低，成活組與死亡組在后期CRP水平差別明顯.陰性組與排斥組兩組間CRP水平有明顯的差異(P<0.05)，心臟排斥反應(yīng)發(fā)生時血漿中CRP濃度水平升高.改良的體外單項混合淋巴細胞培養(yǎng)結(jié)果與心肌內(nèi)膜活檢病理等級有很好的相似性.結(jié)論:CRP可作為判斷心臟移植早期成活質(zhì)量的標志，對監(jiān)測心臟移植術(shù)后有否可能的排斥反應(yīng)有一定的提示意義.改良的體外單向混合淋巴細胞培養(yǎng)方法可作為無創(chuàng)監(jiān)測心臟移植排斥反應(yīng)的有效手段之

3、一.【關(guān)鍵詞】心臟移植；C反應(yīng)蛋白；混合淋巴細胞培養(yǎng)；急性排斥反應(yīng)0引言排斥反應(yīng)及嚴重感染是限制心臟移植受體成活的主要因素，目前用于移植后監(jiān)測心肌損傷和排斥反應(yīng)的指標還相對較少，診斷心臟移植排斥反應(yīng)發(fā)生的“金標準”仍是心肌活檢(EMB)，選擇一種高敏感性和特異性、低風(fēng)險、低成本、方便快速的無創(chuàng)監(jiān)測指標，是臨床研究的重要課題之一.C反應(yīng)蛋白（CreactiveprotEinCRP）由肝細胞合成，是一個急性時相特征蛋白，炎癥和組織損傷可引起其血漿濃度升高.淋巴細胞是構(gòu)成機體免疫系統(tǒng)的基本單位，T淋巴細胞是心臟移植受體排斥異體抗原的重要部分，供體抗原在一定條

4、件下可誘導(dǎo)淋巴細胞凋亡，我們經(jīng)過對心臟移植受體血清CRP動態(tài)變化及免疫系統(tǒng)跟蹤觀察，并對傳統(tǒng)的混合淋巴細胞培養(yǎng)（mixedlymphocyteculture，MLC）技術(shù)進行改良，采取心臟移植受體外周血淋巴細胞體外混合培養(yǎng)以期準確而無創(chuàng)監(jiān)測心臟移植后急性排斥反應(yīng).1對象和方法1.1對象截止20030926我科心臟移植患者26（男21，女5）例，年齡12～68歲，體質(zhì)量31～86（平均59±14）kg.其中17例為擴張性心肌病，4例為缺血性心肌病，3例為克山病，1例先心病，1例為冠心病搭橋術(shù)（CABG）后.心功能（NYHT）III級4例，Ⅳ級22例.術(shù)前超

5、聲心動圖示左室射血分數(shù)（EF）0.21～0.42，平均0.31±0.09；術(shù)前右心導(dǎo)管檢查示肺動脈收縮壓（PAP）32～56（平均45±12）mmHg（1mmHg=0.133kPa）；肺小血管阻力1.3～6.33（平均2.95±0.8）MF2g/d(分2次口服)，術(shù)中開始體外循環(huán)前將甲基強的松龍1000mg加入預(yù)充液中，停機后再靜脈推注甲基強的松龍500mg.術(shù)后采用FK506,MMF（驍悉）和潑尼松三聯(lián)免疫方法，給予甲基強的松龍5mg/（kg·d），持續(xù)1g/(kg·d)，總量每日遞減5mg，直至15mg維持半年；FK506用量為0.1～0.33mg/(k

6、g·d)，術(shù)后1mo維持血中FK506的谷值在15～25μg/L，3mo后為5～15μg/L；MMF用量為2.0g/d，分2次口服，術(shù)后半年減至1.0g/d，分2次口服.術(shù)后1mo行心肌內(nèi)膜活檢(endomyocardialbiopsy,EMB)時抽取外周靜脈抗凝血，分離外周淋巴細胞.在獲取腦死亡心臟移植供體心臟時，同時無菌切取部分供體脾臟，以制備供體淋巴細胞樣本.1.2方法1.2.1CRP檢查采取受體外周靜脈血離心后ELISA法檢測，移植前檢查1～2次，移植后每天檢查1次至1mo，在受體復(fù)查及心內(nèi)膜心肌活檢時同期檢查.其參考的正常范圍0.2～5.0mg/L

7、.1.2.2心內(nèi)膜心肌活檢（endomyocardialbiopsy,EMB)心臟移植后3mo內(nèi)做活檢1～2次，3mo后每隔6mo左右檢查一次，懷疑發(fā)生排斥反應(yīng)時隨時做.每次活檢均在局麻、X線引導(dǎo)下取右心室室間隔處標本，40g/L甲醛固定液固定做病理和2.5g/L戊二醛固定液固定做電鏡檢查.病理切片石蠟包埋，HE染色，急性心臟排斥反應(yīng)等級按照ISHLT（InternationalSocietyofHeartandLungTransplantation）1990年分級標準（0～4等級）進行排斥反應(yīng)分析.1.2.3混合淋巴細胞培養(yǎng)①供體淋巴細胞的制備在RPMI

8、1640培養(yǎng)液中研磨供體脾臟，將細胞懸液離心10mi