通絡(luò)益腎湯對dn模型大鼠腎組織α

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1、通絡(luò)益腎湯對DN模型大鼠腎組織α作者:董正華,楊薪博,應(yīng)小平,宋春光,范麗,李小會【摘要】  目的觀察通絡(luò)益腎湯對糖尿病腎?。―N)大鼠腎小管上皮及間質(zhì)平滑肌肌動蛋白(α-SMA)表達(dá)的影響,探討本方對DN模型大鼠腎保護(hù)作用的可能機(jī)制。方法采用單側(cè)腎切除+STZ誘導(dǎo)DN大鼠模型,大鼠隨機(jī)分為正常組、病理組、通絡(luò)益腎湯治療組、西藥治療組。觀察各組大鼠治療后腎功能(BUN、Scr)、24h尿蛋白定量(24hUpr)、尿β2微球蛋白(β2-MG)含量、腎臟肥大指數(shù)及腎組織α-SMA的表達(dá)等指標(biāo)的變化。結(jié)果與病

2、理組比較,通絡(luò)益腎湯治療組大鼠腎臟肥大指數(shù)、BUN、Scr顯著改善(P<0.01),24hUpr、尿β2-MG明顯下降(P<0.01),腎小管上皮及間質(zhì)α-SMA陽性表達(dá)率明顯下降(P<0.01),與西藥組比較,各項指標(biāo)無顯著性差異(P﹥0.05)。結(jié)論通絡(luò)益腎湯可能通過降低腎小管上皮α-SMA的表達(dá),抑制腎小管上皮-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化,延緩腎小管間質(zhì)纖維化,從而達(dá)到保護(hù)腎臟,改善腎功能的目的。【關(guān)鍵詞】通絡(luò)益腎湯 糖尿病腎病 α-平滑肌肌動蛋白  糖尿病腎?。―N)是糖尿病(DM)發(fā)展到

3、一定階段而出現(xiàn)的主要并發(fā)癥之一。DN持續(xù)、進(jìn)行性發(fā)展,將導(dǎo)致終末期腎臟病(ESRD)。腎間質(zhì)纖維化是導(dǎo)致ESRD的主要原因和共同病理過程,腎小管上皮-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(EMT)則是腎間質(zhì)纖維化的重要發(fā)病機(jī)制之一[1],腎小管間質(zhì)α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)又是EMT的標(biāo)志因子[2]。此前我們針對DN腎虧陰陽兩虛、血絡(luò)瘀阻的病機(jī),使用通絡(luò)益腎湯治療DN,臨床取得較好療效[3]。本實驗通過觀察通絡(luò)益腎湯對DN模型大鼠腎小管上皮-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中α-SMA表達(dá)的影響,探討其對DN腎間質(zhì)纖維化的影響,揭示其腎

4、保護(hù)作用的可能機(jī)制?! ?材料  1.1動物SD雄性大鼠,60只,體質(zhì)量(180±20)g,由第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供,動物合格證號:SCXK(軍)2007-007(08034)?! ?.2用藥及試劑通絡(luò)益腎湯由桃仁、水蛭、生地、酒大黃、山萸肉、山藥、黃芪等組成,大鼠用量按  3結(jié)果  3.1治療后各組大鼠腎功能、腎臟肥大指數(shù)的比較結(jié)果見表1。表1各組模型大鼠腎功能、腎臟肥大指數(shù)的比較(略)B組大鼠BUN、Scr、腎臟肥大指數(shù)較A組明顯增高,均有極顯著性差異(P<0.01);與B組比較,C組、

5、D組大鼠BUN、Scr、腎臟肥大指數(shù)明顯降低,具有極顯著性差異(P<0.01)。C、D兩組比較,上述指標(biāo)無明顯差異(P>0.05)。說明通絡(luò)益腎湯和西藥治療在改善DN大鼠腎臟肥大指數(shù)、腎功能方面有都有比較理想的療效,兩者之間無顯著性差異?! ?.2治療后各組大鼠24hUpr、尿β2-MG含量比較結(jié)果見表2。表2各組模型大鼠24hUpr、β2-MG含量(略)B組大鼠24hUpr、β2-MG含量較A組明顯升高,有極顯著性差異(P<0.01);C組、D組與B組比較,24hUpr、β2-MG含量均有

6、明顯降低,具有極顯著性差異(P<0.01)。C組與D組比較,兩者無明顯差異(P>0.05)。說明通絡(luò)益腎湯和西藥治療均有降低24hUpr、β2-MG含量的作用,且療效相當(dāng)。  3.3各組大鼠腎臟組織α-SMA的表達(dá)免疫組化陽性表達(dá)分析,每組樣本按順序觀察9個視野,采PHOTOSHOP圖像處理軟件計算小管間質(zhì)免疫組化檢測陽性面積和小管間質(zhì)總面積的比值,取9個比值的均值作為每組實驗大鼠α-SMA的測定值。結(jié)果見表3。表3各組大鼠腎組織α-SMA的比較(略)  4討論腎間質(zhì)纖維化主要表現(xiàn)為腎臟固有細(xì)胞消

7、失、肌成纖維細(xì)胞增多、細(xì)胞外基質(zhì)沉積等[7]。糖尿病腎病是慢性發(fā)展過程,目前研究表明,慢性腎臟疾病腎功能的惡化趨勢主要決定于腎小管間質(zhì)纖維化(TIF)的程度和范圍。在TIF過程中,腎小管基底膜被破壞的同時常伴有腎小管上皮細(xì)胞向肌纖維母細(xì)胞樣細(xì)胞轉(zhuǎn)分化,稱之為腎小管上皮-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(EMT),繼之出現(xiàn)間質(zhì)區(qū)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)大量產(chǎn)生和沉積,導(dǎo)致間質(zhì)區(qū)擴(kuò)展加寬,腎小管萎縮,形成TIF。另有資料顯示,腎臟病時腎間質(zhì)中的成纖維細(xì)胞大部分都是通過EMT由腎小管上皮細(xì)胞(RTEC)轉(zhuǎn)化而來的,且在基因鼠模型中

8、,選擇性阻斷EMT可以明顯改善梗阻性腎病所致的TIF。因此,EMT現(xiàn)象已日益被認(rèn)為是TIF形成和進(jìn)展過程中的重要環(huán)節(jié)[1]。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)α-SMA是腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化和腎間質(zhì)纖維化程度的重要指標(biāo)[2]。研究發(fā)現(xiàn)人腎組織中腎小管間質(zhì)內(nèi)α-SMA表達(dá)量與腎小管間質(zhì)纖維化程度及腎功能惡化程度正相關(guān)[8]。李暖等[9]動物實驗研究亦發(fā)現(xiàn)腺嘌呤腎小管間質(zhì)纖維化大鼠模型第7周α-SMA表達(dá)已明顯增多,第12、17周時α-SMA表達(dá)量進(jìn)一步增加,α-SM

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