產(chǎn)胞外多糖酵母菌株的篩選鑒定及多糖結(jié)構(gòu)初步研究

產(chǎn)胞外多糖酵母菌株的篩選鑒定及多糖結(jié)構(gòu)初步研究

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1、摘要川Jl『『JI『『IJ『

2、J『IJI『『J川Ⅲ『JJIJIffffJill川Y20512,,,11i10Jlliii7i摘要微生物多糖是由細(xì)菌、真菌和藻類產(chǎn)生的多糖,以胞壁多糖、胞內(nèi)多糖和胞外多糖3種形式存在。胞外多糖由于具有易于分離、可連續(xù)發(fā)酵、不受季節(jié)、地域和病蟲(chóng)害的限制等優(yōu)點(diǎn),日益受到學(xué)者們的重視。酵母多糖是微生物胞外多糖的一種,研究發(fā)現(xiàn)其具有多種生理活性,能夠提高機(jī)體免疫力,還具有抗氧化、抗病毒和抑制腫瘤等作用。本文的主要研究?jī)?nèi)容和成果如下:(1)從自然界篩選到3株胞外多糖產(chǎn)量較高的酵母菌株,通過(guò)5.8SrDNA序列測(cè)定

3、及系統(tǒng)發(fā)育分析對(duì)這3株酵母進(jìn)行了鑒定,結(jié)果表明:從左優(yōu)紅葡萄中分離得到的Z14和Z20與東方伊薩酵母(Issatchenkiaorientalis)處于同一分支,相似性達(dá)到99%以上;從落葉松附近表層土壤分離得到的L25與土生隱球酵母(Cryptococcushumicolus)處于同一分支,相似性為98.8%。(2)為提高胞外多糖產(chǎn)量,對(duì)東方伊薩酵母Z20的發(fā)酵工藝條件進(jìn)行了研究,Z20產(chǎn)胞外多糖的最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基配方為:葡萄糖8%,fNH4hSO..0.2%,KH2P040.1%,酵母浸粉0.1%,CaCl20.01%,在此培養(yǎng)基

4、下,胞外多糖產(chǎn)量為2.046mg/mL,比原始菌株的產(chǎn)量1.137mg/mL提高80%。Z20產(chǎn)胞外多糖的最佳發(fā)酵條件為:初始pH為6.0,搖床轉(zhuǎn)數(shù)為180r/min,裝液量為50mL/250mL,發(fā)酵溫度為30℃,接種量為2%,發(fā)酵時(shí)間為6d,在此條件下,胞外多糖產(chǎn)量可達(dá)到2.327mg/rnL,產(chǎn)量提高了104%。(3)菌株Z20的胞外多糖經(jīng)DEAE.Cellulose52層析初步分離純化得到單一的純化多糖組分EPS.I。利用傅立葉紅外光譜對(duì)EPS.I進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)EPS.I具有.OH、.CH、.C=O等典型的多糖特征官能團(tuán);利

5、用氣相色譜對(duì)EPS.I的水解產(chǎn)物進(jìn)行分析,結(jié)果表明:EPS.I的水解產(chǎn)物由甘露糖、木糖和鼠李糖三種單糖組成,組成比例分別為84.9l%、11.47%和3.62%。(4)對(duì)菌株Z20胞外多糖的體外抗氧化和體外抑菌活性進(jìn)行了初步研究。以胞外多糖的總抗氧化能力和對(duì)DPPH、羥基自由基、超氧陰離子的清除率四個(gè)方面來(lái)考察EPS.I的體外抗氧化能力,結(jié)果驗(yàn)證了EPS.I具有抗氧化活性,當(dāng)EPS.I濃度為20mg/mL時(shí),對(duì)DPPH·和超氧陰離子的清除率均達(dá)到80%以上.用濾紙片法測(cè)定了EPS.I飽和溶液對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、

6、地衣、青霉和黑曲霉的抑制作用,試驗(yàn)證明EPS.I對(duì)以上菌種的生長(zhǎng)繁殖均無(wú)明顯抑制作用。關(guān)鍵詞酵母;胞外多糖;發(fā)酵條件優(yōu)化;結(jié)構(gòu)分析;體外功能東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractMicrobialpolysuccharideswereproducedbybacterial,fungiandalgae.Microbialpolysaccharideswhichincludedcellwallpolysaecharide,inWaeellularpolysaecharideandextrcellularpolysaccharidege

7、tIno他andmoreattentionfromthereaschersfortheirsuperioritiessuchasbeingeasytoseparation,continuousfermentation,noaffectionofseason,regional,diseasesandinsectpests.Yeastpolysaccharideisakindofmicrobialextrcellularpolysaccharideswhichhasmanyphysiologicalactivities,suchasmo

8、dulatinghumanimmunesystem,oxidationprevention,antivirus,antimmorandSOon.1f1豫maincontentsandresultsofthisthesisareasfollows.(1)Threehigherexopolysaccharide-producingyeaststainswe他obtainedbyscreeningfromnaturalsamplesusingspread-platemethod,Theresultsof5.8SrDNAsequencean

9、dphylogenefictreeanalysisshowedthatsimilaritiesoftwoyeastsisolatedfrom"Zuoyouhong”grape(Z14andZ20)wereover99%compared

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