hplc法測(cè)定虎杖中白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的含量[1][1].孔改

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1、HPLC法測(cè)定降酶片中白藜蘆醇和虎杖苷的含量劉德茂1史德勝2（1大連公安醫(yī)院，遼寧大連1160112天津丹溪國(guó)藥研究所天津300061）降酶片由虎杖、白花舌蛇草、柴胡、茵陳等中藥組成，具有疏肝理氣，清熱利濕的功效，臨床主治慢性肝炎及早期肝硬化?；⒄葹槠渲魉幹?，白藜蘆醇和虎杖苷為其中的主要有效成分，因此可選擇白藜蘆醇和虎杖苷作為其質(zhì)量控制的定量指標(biāo)。本研究建立了HPLC法測(cè)定其主要有效成分白藜蘆醇和虎杖苷含量的方法。1.儀器與試劑LC—10A型高效液相色譜儀；SPD—10A紫外檢測(cè)器；Anast

2、ar色譜工作站；乙腈為色譜純，水為蒸餾水，其他試劑為分析純?；⒄溶諏?duì)照品（批號(hào)11575-200301），白藜蘆醇對(duì)照品（批號(hào)111535-200301）由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。降酶片由本院制劑室提供，批號(hào)060820、060821、060822。2.方法與結(jié)果2.1色譜分析條件：IrregularC18柱（4.6×250mm5μ）；流動(dòng)相：乙腈：水（25：75）；流速：1.0ml·min-1；柱溫：35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：306nm；進(jìn)樣量：20μl；理論塔板數(shù)以虎杖苷峰計(jì)不低于3000，以白

3、藜蘆醇峰計(jì)不低于3000。2.2對(duì)照品溶液的制備：精密稱取虎杖苷對(duì)照品8.04mg、白藜蘆醇對(duì)照品6.12mg，分別置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液。各精密量取3ml，分別置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。2.3供試品溶液的制備：取本品20片，研細(xì)，取50mg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理30分鐘，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。2.4線性關(guān)系考察：分別精密量取虎杖苷對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0ml、2.

4、0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml置10ml量瓶中，白藜蘆醇對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別吸取20μl進(jìn)樣，記錄峰面積。以對(duì)照品的濃度為橫坐標(biāo)（X），以相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸，得回歸方程?；⒄溶眨篩=38364300X—5194.1，=0.9999，進(jìn)樣濃度在0.00804～0.04020mg·ml-1與峰面積呈良好的線性關(guān)系；白藜蘆醇：Y=85777166—2272.48，r=0.9

5、999，進(jìn)樣濃度在0.00612～0.03060mg·ml-1與峰面積呈良好的線性關(guān)系。2.5陰性對(duì)照試驗(yàn)：按降酶片的處方量制備不含虎杖藥材的陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液，吸取20μl進(jìn)樣，按上述條件測(cè)定，結(jié)果表明，陰性樣品中其他成分對(duì)虎杖苷、白藜蘆醇色譜無干擾。2.6精密度試驗(yàn)：各取虎杖苷、白藜蘆醇對(duì)照品溶液，進(jìn)樣20μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果峰面積RSD分別為0.36%、0.87%。2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)：對(duì)同一供試品溶液，按上述色譜條件，于0、2、4、6、8小時(shí)

6、進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果溶液8h內(nèi)穩(wěn)定，虎杖苷峰面積RSD為0.57%，白藜蘆醇峰面積為0.86%。2.8重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一供試品樣品平行制備6份供試品溶液，依法檢測(cè)，測(cè)定虎杖苷、白藜蘆醇的含量，結(jié)果虎杖苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為24.22mg/g，RSD=1.05%。白藜蘆醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為18.61mg/g，RSD=1.42%。2.9回收率試驗(yàn)：采用加樣回收法。取已知含量的樣品，分別加虎杖苷、白藜蘆醇對(duì)照品適量，按樣品測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定虎杖苷、白藜蘆醇的含量，計(jì)算回收率。結(jié)果虎杖苷平均回收率為100.44%，R

7、SD為1.67%；白藜蘆醇平均回收率為101.02%，RSD為1.86%（n=6）。2.10樣品的測(cè)定：將3批樣品分別按供試品溶液制備法制成溶液，依上述色譜條件分別進(jìn)樣20μl，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中虎杖苷、白藜蘆醇的含量，結(jié)果見表1，色譜圖見圖1。表1降酶片中虎杖苷含量測(cè)定的結(jié)果（n=3）Table1AnalysisofcontentofPeceidandResveratolinJiangmeiTablet(n=3)批號(hào)虎杖苷的含量(mg·g-1)RSD（%）白藜蘆醇的含量（mg·g-1）RSD（

8、%）06082024.251.4918.621.8106082124.481.3218.571.5406082224.231.3019.081.36ABCD圖1虎杖苷對(duì)照品（A）、白藜蘆醇對(duì)照品（B）、供試品（C）和陰性對(duì)照（D）的色譜圖Fig.1HPLCchromatogramsofPeceidreferencesubstance(A),Resveratolreferencesubstance(B),Sample（C）andSamplewithoutPolygonumcuspidatumSie