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《人白介素24基因重組腺病毒載體的構(gòu)建與鑒定-外科學(xué)(整形)專業(yè)畢業(yè)論文》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人呈交的學(xué)位論文系在導(dǎo)師指導(dǎo)下所取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，也不包含)-b獲得廣東醫(yī)學(xué)院或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料。作者簽名：益薄日期：蘭塑蚪學(xué)位論文知識產(chǎn)權(quán)聲明本人在就讀研究生期間所完成的學(xué)位論文及其相關(guān)成果，知識產(chǎn)權(quán)歸屬學(xué)校。本人在畢業(yè)離校前會將有關(guān)的研究資料和結(jié)果全部上交導(dǎo)師，離校后發(fā)表或使用學(xué)位論文或與該論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時，署名單位仍然為廣東醫(yī)學(xué)院。學(xué)?？梢詫W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位
2、論文，可以公布(包括刊登)論文的全部或部分內(nèi)容。導(dǎo)師享有發(fā)表學(xué)位論文、申請成果和專利的權(quán)利。注：保密的學(xué)位論文在解密后適用本聲明。作者簽日期：2生壘翌：笸二二f導(dǎo)師簽日期：．Z翌墮二箜二三；人白介素24基因重組腺病毒載體的構(gòu)建與鑒定中文摘要【目的】病理性瘢痕包括增生性瘢痕與瘢痕疙瘩，其形成過程受到各種因素的影響。一般認(rèn)為它們是由創(chuàng)傷引起，以成纖維細(xì)胞的過度增生及膠原等大量細(xì)胞外基質(zhì)的過度產(chǎn)生和沉積為特征的皮膚纖維增生性疾病。病理性瘢痕的發(fā)病機(jī)理至今不甚清楚，但以往大量研究表明瘢痕的過度增生與細(xì)胞因子、癌基因和免疫反應(yīng)等密切相關(guān)。越來越多的研究表明人白介素24(interle
3、ukin24．IL一24)具有重要的免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)功能，對腫瘤細(xì)胞具有選擇性生長抑制和誘導(dǎo)凋亡作用。重組腺病毒載體是目前應(yīng)用最廣泛的生物病毒載體之一，與其他病毒載體系統(tǒng)比較，具有明顯優(yōu)點(diǎn)：能將外源基因高效導(dǎo)入哺乳動物細(xì)胞；其轉(zhuǎn)染不依賴細(xì)胞分裂，既可轉(zhuǎn)染分裂期細(xì)胞，又可轉(zhuǎn)染非分裂期細(xì)胞；攜帶的外源基因不與宿主基因整合，對人致病性低。這些優(yōu)點(diǎn)使其成為一種高效而安全的基因轉(zhuǎn)移工具，廣泛應(yīng)用于基因治療的研究。我們既往的實(shí)驗(yàn)證實(shí)IL．24在增生性瘢痕、瘢痕疙瘩中的表達(dá)明顯低于正常皮膚及正常瘢痕，提示IL．24的表達(dá)降低可能與病理性瘢痕的形成有密切關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建含有人IL．24基因的重
4、組腺病毒載體，為下一步轉(zhuǎn)染病理性瘢痕成纖維細(xì)胞，觀察IL一24在細(xì)胞中表達(dá)后對細(xì)胞增長的影響奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)?！痉椒ā縏RIzol法提取皮膚成纖維細(xì)胞的總RNA后，利用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增目的片斷IL．24；使用T4連接酶連接BglII及XhoI雙酶切后的目的片斷IL．24與pAdTrack-CMV，鑒定并擴(kuò)增正確重組腺病毒質(zhì)粒(pAdTrackCMV-IL-24)；挑選陽性克隆的穿梭質(zhì)粒pAdtrack．CMV-IL．24轉(zhuǎn)入含有質(zhì)粒pAdEasy-1的BJ5183感受態(tài)細(xì)菌進(jìn)行同源重組，鑒定、擴(kuò)增；應(yīng)用脂質(zhì)體將成功重組的腺病毒載體質(zhì)粒pAdEasy-IL．24轉(zhuǎn)入293A細(xì)
5、胞中進(jìn)行包裝、擴(kuò)增，病毒滴度測定后純化。應(yīng)用純化后的腺病毒載體感染病理性瘢痕的成纖維細(xì)胞?！窘Y(jié)果】1．RT-PCR反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳顯示擴(kuò)增片斷約為620bp，與目的片斷大小基本符合，無非特異性擴(kuò)增。2．腺病毒穿梭質(zhì)粒pAdtrack．CMV-IL．24經(jīng)B西II及XhoI雙酶切后電泳見大約9kb(質(zhì)粒骨架)和620bp(IL．24基因)2個片段，與目的片斷符合，測序結(jié)果表明克隆得到的序列與GenBank中IL．24序列一致。3．同源重組腺病毒質(zhì)粒pAD．IL．24經(jīng)PacI酶切后電泳，可見約4．5kb和30kb左右的電泳帶各一條。4．重組腺病毒質(zhì)粒pAD．IL．
6、24經(jīng)質(zhì)脂體轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞，2天后開始出現(xiàn)綠色熒光蛋白(GFP)表達(dá)，熒光表達(dá)隨時間增強(qiáng)。5．用TCID50方法和GFP陽性計(jì)數(shù)法計(jì)算病毒滴度約為2．0x109pfu／ml?！窘Y(jié)論】成功構(gòu)建了有較強(qiáng)感染能力的含hlL．24基因的重組腺病毒載體。【關(guān)鍵詞】病理性瘢痕；成纖維細(xì)胞；hlL．24；腺病毒；基因治療2ConstructionandIdentificationofRecombinantAdenovirusVectorofhIL．24ABSTRACT[Objective]Hypertrophicscarandkeloidareformedwithexcessivepr
7、oliferationoffibroblastsandaccumulationofexcessivecollagenandotherextracellularmatrix．Themechanismofpathologicalscarisnotclearandrecentstudiessuggestedthattheexcessiveaccrementitionofpathologicalcicatrixhaveclosecorrelationwitllimmunologicmechanism，cytokineand
