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《山大生化實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)一、三酵母rna的提取和含量測(cè)定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、酵母RNA的提取和含量測(cè)定姓名：周超學(xué)號(hào)：201100140067班級(jí)：11級(jí)生命基地同組者：劉炳煜時(shí)間：2011年3月26fl【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?.掌握稀間法提取酵母RXA的原理和方法2.了解測(cè)量核算濃度的不同方法的原理3.掌握紫外吸收法測(cè)定核酸濃度的原理和技術(shù)4.學(xué)會(huì)使用紫外分光光度計(jì)5.學(xué)會(huì)使用離心機(jī)【實(shí)驗(yàn)原理】1.酵母RNA提取的原理：(1)酵母核酸屮RNA含量較多，DNA則少與2%(2)RNA可溶于堿性溶液，當(dāng)堿被中和后，可加入乙醇使其沉淀，由此可制得粗RNA制品。(3)用堿提取的RNA有不同程度的降解
2、。2.紫外吸收法測(cè)RNA含量的原理：(1)核酸具冇吸收紫外線的性質(zhì)，在波長(zhǎng)260nm處有最大吸收，且在一定濃度范圍內(nèi)光吸收值與濃度成止比(5-45ug/ml),符合朗伯■比爾定律。(2)優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，樣品用量少，不用顯色，測(cè)完后樣品可以繼續(xù)使用。(3)缺點(diǎn)：當(dāng)有大分子物質(zhì)存在吋，也會(huì)有一定的吸收，會(huì)影響測(cè)量精確度?！緦?shí)驗(yàn)試劑】1.提取試劑：0.2%NaOH溶液酸性乙醇：5ml濃HC1加入到500ml95%乙醇中混勻95%乙醇無(wú)水乙醇1.含量測(cè)定試劑：0.2%NaOII溶液pH試紙(1-14)標(biāo)準(zhǔn)核酸：20
3、0ug/ml待測(cè)樣品核酸【實(shí)驗(yàn)步驟】(1)將4g干酵母粉放入200ml錐形瓶中,加入40ml0.2%的NaOH溶液混勻。(2)沸水浴30min,然后用流水冷卻(3)4000轉(zhuǎn)/分離心15秒，保留上清液(4)在上清液中加入40ml酸性乙醇，邊加邊攪拌，靜置5分鐘左右，再4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，保留沉淀(5)用20ml95%乙醇分兩次洗滌沉淀，每次洗后3000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘(6)用20ml無(wú)水乙醇分兩次洗滌，每次洗后3000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘(7)收集沉淀于濾紙上備用。2.RNA含量的測(cè)定：(1)準(zhǔn)確稱取0.
4、2-0.25g(因提取到的RNA粗品量太少，本次實(shí)驗(yàn)使用的R7A量?jī)H為0.1910g)樣品核酸,加2ml0.2%NaOH溶液和lml水溶解，調(diào)成糊狀(2)再加入50ml左右的水溶解，邊溶解邊傳移到100ml燒杯屮，用0.2%NaOH調(diào)至中性，定容至100ml(3)再分3次取2.5n)l定容至100ml備用，做平行實(shí)驗(yàn)(4)取200ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)RXA20ml,加水定容至100ml,得到40ug/ml的RNA備用(5)再將40ug/ml的RNA按表一加樣稀釋，得到5ug/ml>10ug/ml>20ug/ml
5、>30ug/ml>40ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液(6)用紫外分光光度計(jì)測(cè)量吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品純度。【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】表一管號(hào)標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品012345678標(biāo)準(zhǔn)RNA(40ug/ml)/ml02.55101520//水/ml2017.5151050///標(biāo)準(zhǔn)RNA濃度/(ug/ml)0510203040//01)值00.0970.1910.3830.6210.7670.6380.6480.638圖一標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0196X計(jì)算：三次平行實(shí)驗(yàn)平均0D值=0.6413,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到稀釋后的RNA濃
6、度為32.719ug/ml,則樣品RNA的純度為(32.719*40*100)/(0.1910*10”)=0.6852【思考討論】實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析：本次實(shí)驗(yàn)最終的測(cè)定結(jié)杲為，RNA的純度為6&52%,造成這個(gè)結(jié)杲的原因：(1)用稀堿法提取的RNA有不同程度的降解(2)人在操作過(guò)程屮，會(huì)呼出少量的RA酶，也會(huì)降解樣品RNA,導(dǎo)致純度下降。(3)提取的樣品屮冇細(xì)胞內(nèi)含物，也會(huì)對(duì)純度冇影響。注意事項(xiàng)：(1)離心機(jī)使用的注意事項(xiàng)：離心時(shí)，離心管要平衡對(duì)稱放置，既耍位置對(duì)稱,又要重量平衡。否則會(huì)造成離心機(jī)損壞。(2)提
7、取RA吋，用酒精沉淀吋，一定要充分，邊加酒精邊攪拌上清液。(3)提取RXA時(shí)，用酒精洗滌沉淀時(shí)，一定要把酒精與沉淀混勻，這樣做有利丁?增高捉取濃度。(4)RNA含量測(cè)定中，若RNA樣品少與2.0g時(shí)，取2.5ml的母液，定容至100ml；若RM樣品量為2.0-2.5g,則取2.0ml的母液，定容至100ml,這樣稀釋之后,可以保證測(cè)量液的吸光值在標(biāo)準(zhǔn)曲線之內(nèi)。(5)使用紫外分光光度計(jì)測(cè)量RXA含量時(shí)，一定要注意做平行實(shí)驗(yàn)，即分別取3次2.0ml的母液，分別定容至100ml,制成3個(gè)測(cè)量液，切記平行實(shí)驗(yàn)不是
8、把相同的測(cè)量液測(cè)三次。
