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《e2-2基因腺病毒載體的構(gòu)建及其對(duì)epcs生長(zhǎng),增殖及id1表達(dá)的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、E2-2基因腺病毒載體的構(gòu)建及其對(duì)EPCs生長(zhǎng)、增殖及ID1表達(dá)的影響劉曉麗，楊海捷，譚志勝，蘇勇，朱琴，王紅(650032昆明，成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院干部病房)[摘要]目的構(gòu)建轉(zhuǎn)錄因子E2-2基因腺病毒載體，并觀測(cè)內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelialprogenitorcells,EPCs）過(guò)表達(dá)E2-2基因?qū)NA結(jié)合抑制因子-1（inhibitorofDNAbinding/differentiation,ID1）表達(dá)的影響。方法 分離、培養(yǎng)并鑒定小鼠骨髓EPCs。RT-PCR法擴(kuò)增E2-2基因CDs全長(zhǎng)DNA，克隆入載體pTG19-T后，亞克隆入腺病毒穿梭載體pAdTrack-CMV中，構(gòu)建p
2、AdTrack/E2-2重組載體,與pAdEasy-1骨架質(zhì)粒同源重組形成重組病毒pAd/E2-2，經(jīng)293細(xì)胞包裝，獲具高效感染力的重組pAd/E2-2病毒。將該病毒感染EPCs，倒置顯微鏡觀測(cè)經(jīng)感染的EPCs的GFP表達(dá)情況。CCK-8（cellcountkit-8)）法檢測(cè)病毒pAd/E2-2對(duì)EPCs生長(zhǎng)、增殖的影響。RT-PCR、Westernblot分別檢測(cè)經(jīng)感染的EPCs中E2-2與ID1基因及其編碼蛋白的表達(dá)情況，并予以定量分析。結(jié)果分離、培養(yǎng)并鑒定到小鼠骨髓EPCs?？寺〉?013bp的E2-2基因，并獲得高效感染力的重組pAd/E2-2病毒。CCK-8法檢測(cè)表明，與對(duì)照比較
3、，過(guò)表達(dá)E2-2的EPCs的生長(zhǎng)、增殖速度減慢，48h開(kāi)始變得尤為明顯（P<0.01）；RT-PCR、Westernblot及定量分析結(jié)果顯示，E2-2能下調(diào)ID1的表達(dá)，與對(duì)照比較，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。結(jié)論分離、培養(yǎng)并鑒定到小鼠骨髓EPCs?？寺〉紼2-2基因，證實(shí)了E2-2能明顯抑制EPCs的生長(zhǎng)、增殖，并能下調(diào)ID1基因的表達(dá)。[關(guān)鍵詞]EPCs；E2-2基因；ID1基因；腺病毒[中圖法分類號(hào)][文獻(xiàn)標(biāo)志碼]AConstructionofadenovirusvectorofE2-2geneanditseffectsontheexpressionofID1geneLiuXia
4、oli,YangHaijie,TanZhisheng,SuYong,ZhuQin,WangHong(militaryunitscadresinKunmingGeneralHospitalofchengdumilitaryregion，Kunming650032)[Abstract]ObjectiveToconstructtheadenovirusvectorofE2-2geneandinvestigatewhethertheadenovirusvectorcarryingE2-2geneaffectingtheexpressionofID1geneinendothelialprogenitor
5、cells（EPCs）.MethodsMurineEPCsofbonemarrowshouldbeisolated,culturedandidentified.cDNAfragmentencodingmurineE2-2genewasamplifiedbyreversetranscriptase-polymerasechainreaction(RT-PCR).ThePCRamplifiedfragmentofE2-2genewasfirstclonedintopTG19-Tvector,andthensubclonedE2-2geneintotheshuttlevectorpAdTrack-C
6、MVforconstructingtherecombinantplasmidspAdTrack/E2-2,whichhomologouslyrecombinatedwiththeadenoviralbackbonevectorsAdeasy-1togeneraterecombinantadenoviralplasmidsAd/E2-2.TherecombinantadenovirusesAd/E2-2,whichwereemployedtoinfectEPCs,weregeneratedbytransfectingtherecombinantadenoviralDNAinto293cells.
7、Theexpressionofenhancedgreenfluorescentprotein(EGFP)intransfectedEPCswereobservedunderinvertmicroscope.ThegrowthandproliferationoftransfectedEPCsweretestedviaCellcountkit-8(CCK-8),andtheexpreesionofE2
