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1、Myostatin基因免疫載體的構(gòu)建及其對(duì)小鼠肌肉增殖的影響TheconstructionofMyostatingeneimmunevectoranditsinfluenceontheabilityofmuscleproliferationinmice作者姓名：李傲楠李傲楠專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：動(dòng)物遺傳育種與繁殖指導(dǎo)教師：趙志輝教授學(xué)位類(lèi)別：農(nóng)學(xué)碩士答辯日期：2015年6月3日本研究由吉林省科技支撐重點(diǎn)項(xiàng)目(20110229)和國(guó)家“863”計(jì)劃（2013AA102505）資助Thisresearchwasfunde
2、dbyJilinScientificandTechnologicalDevelopmentProgram(20110229)andTheNationalHighTechnologyResearchandDevelopmentProgramofChina(2013AA102505)中文摘要Myostatin基因免疫載體的構(gòu)建及其對(duì)小鼠肌肉增殖的影響中國(guó)是畜牧業(yè)大國(guó)，可同時(shí)中國(guó)又是人口大國(guó)，這就導(dǎo)致了中國(guó)人均占有的畜產(chǎn)品數(shù)量還依然很少。然而伴隨著人們生活水平的逐漸提高，對(duì)畜產(chǎn)品尤其是優(yōu)質(zhì)的肉類(lèi)產(chǎn)品的需求越來(lái)越
3、高，這就要求研究者們進(jìn)一步研究出高產(chǎn)量、高品質(zhì)的畜產(chǎn)品。肌生成抑制素（Myostatin，MSTN），又稱(chēng)GDF-8，是TGF-β超家族的成員之一，是骨骼肌生長(zhǎng)的負(fù)調(diào)控因子，因其與“雙肌性狀”關(guān)系密切而被廣泛關(guān)注，該基因的缺失或突變能夠引起所編碼的蛋白質(zhì)失活，進(jìn)而消除其對(duì)骨骼肌生長(zhǎng)的抑制作用，導(dǎo)致其不能調(diào)節(jié)肌纖維的降解活動(dòng)，最終造成肌肉的增生和肥大。由此看來(lái)，Myostatin基因與家畜的肉質(zhì)和胴體性狀密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)主要研究肌生成抑制素Myostatin基因的融合表達(dá)質(zhì)粒對(duì)小鼠肌肉增殖能力的影響。本實(shí)驗(yàn)
4、首先利用巢式PCR的方法擴(kuò)增出肌生成抑制素Myostatin基因的編碼區(qū)，并將該片段連入到乙肝表面抗原HBsAg基因的3’末端，用以增加其免疫原性。而后將其連接到真核表達(dá)載體pEF1α-IRES-DsRed-Express2上，成功得到肌生成抑制素與乙肝表面抗原融合表達(dá)質(zhì)粒pEF1α-DsRed-S-MSTN。將該融合質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到牛胎兒成肌細(xì)胞中，利用熒光定量PCR技術(shù)以及westernblot技術(shù)檢測(cè)得知，該真核表達(dá)載體能夠在牛胎兒成肌細(xì)胞中高效表達(dá)。而后，又以3周齡的昆明小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，用基因免疫的方法
5、檢驗(yàn)該融合質(zhì)粒對(duì)小鼠肌肉增殖能力的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用ELISA檢測(cè)免疫后小鼠血清內(nèi)生長(zhǎng)激素和甘油三酯水平可知，在9周齡時(shí)實(shí)驗(yàn)組小鼠生長(zhǎng)激素高于對(duì)照組，且其后又繼續(xù)有升高趨勢(shì)。5周齡時(shí)實(shí)驗(yàn)組甘油三酯水平顯著高于對(duì)照組（p<0.05）,且其后一直高于對(duì)照組小鼠的甘油三酯水平。而對(duì)于小鼠體重來(lái)說(shuō)，前期實(shí)驗(yàn)組低于對(duì)照組，在5周齡時(shí)高于對(duì)照組，而后又降低。實(shí)驗(yàn)組體重增長(zhǎng)率在3周齡到5周齡時(shí)達(dá)到一個(gè)增長(zhǎng)高峰，在3周齡到5周齡之間實(shí)驗(yàn)組的體重增長(zhǎng)率顯著高于對(duì)照組（p<0.05）。對(duì)基因免疫3周后的小鼠進(jìn)行屠宰，其腿
6、重、腿長(zhǎng)、腿寬及股四頭肌重均無(wú)顯著差異（p>0.05）。I綜上所述，肌生成抑制素Myostatin基因與乙肝表面抗原融合質(zhì)粒pEF1α-DsRed-S-MSTN能夠成功在牛胎兒成肌細(xì)胞和小鼠體內(nèi)表達(dá)。并且在小鼠體內(nèi)的初步實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明其能夠?qū)π∈篌w內(nèi)生長(zhǎng)激素和甘油三酯水平以及肌肉的增殖具有一定的作用。且對(duì)小鼠體重的增長(zhǎng)率有積極作用，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)，為基因免疫牛實(shí)驗(yàn)做出鋪墊。以期進(jìn)一步可以為高肌肉產(chǎn)量肉牛的培育做出一定的貢獻(xiàn)，但是更復(fù)雜具體的調(diào)控作用還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。關(guān)鍵字：Myostatin基
7、因載體構(gòu)建基因免疫小鼠肌肉增殖IIAbstractTheconstructionofMyostatingeneimmunecarrieranditsinfluenceontheabilityofmuscleappreciationinmiceChinaisabigcountryofanimalhusbandry,butChinaisalsothecountrywithlargepopulationatthesametime.Whatismore,theamountofmeatproductsoccupat
8、ionofperpersonisstillveryfew.Andwiththeincreasingofpeople'slivingstandard,thedemandforanimalproducts,especiallythehighqualityofmeatproductsismoreandmorehigh.Therefore,thisrequiresresearchersfurtherdevelopedhigh-yiel
