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《e2-2基因腺病毒載體的構(gòu)建及其對epcs生長,增殖及id1表達的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、E2-2基因腺病毒載體的構(gòu)建及其對EPCs生長、增殖及ID1表達的影響劉曉麗，楊海捷，譚志勝，蘇勇，朱琴，王紅(650032昆明，成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院干部病房)[摘要]目的構(gòu)建轉(zhuǎn)錄因子E2-2基因腺病毒載體，并觀測內(nèi)皮祖細胞（endothelialprogenitorcells,EPCs）過表達E2-2基因?qū)NA結(jié)合抑制因子-1（inhibitorofDNAbinding/differentiation,ID1）表達的影響。方法 分離、培養(yǎng)并鑒定小鼠骨髓EPCs。RT-PCR法擴增E2-2基因CDs全長DNA，克隆入載體pTG19-T后，亞克隆入腺病毒穿梭載體pAdTrac
2、k-CMV中，構(gòu)建pAdTrack/E2-2重組載體,與pAdEasy-1骨架質(zhì)粒同源重組形成重組病毒pAd/E2-2，經(jīng)293細胞包裝，獲具高效感染力的重組pAd/E2-2病毒。將該病毒感染EPCs，倒置顯微鏡觀測經(jīng)感染的EPCs的GFP表達情況。CCK-8（cellcountkit-8)）法檢測病毒pAd/E2-2對EPCs生長、增殖的影響。RT-PCR、Westernblot分別檢測經(jīng)感染的EPCs中E2-2與ID1基因及其編碼蛋白的表達情況，并予以定量分析。結(jié)果分離、培養(yǎng)并鑒定到小鼠骨髓EPCs?？寺〉?013bp的E2-2基因，并獲得高效感染力的重組pAd/E2-
3、2病毒。CCK-8法檢測表明，與對照比較，過表達E2-2的EPCs的生長、增殖速度減慢，48h開始變得尤為明顯（P<0.01）；RT-PCR、Westernblot及定量分析結(jié)果顯示，E2-2能下調(diào)ID1的表達，與對照比較，差異具統(tǒng)計學意義(p<0.01)。結(jié)論分離、培養(yǎng)并鑒定到小鼠骨髓EPCs。克隆到E2-2基因，證實了E2-2能明顯抑制EPCs的生長、增殖，并能下調(diào)ID1基因的表達。[關(guān)鍵詞]EPCs；E2-2基因；ID1基因；腺病毒[中圖法分類號][文獻標志碼]AConstructionofadenovirusvectorofE2-2geneanditseffects
4、ontheexpressionofID1geneLiuXiaoli,YangHaijie,TanZhisheng,SuYong,ZhuQin,WangHong(militaryunitscadresinKunmingGeneralHospitalofchengdumilitaryregion，Kunming650032)[Abstract]ObjectiveToconstructtheadenovirusvectorofE2-2geneandinvestigatewhethertheadenovirusvectorcarryingE2-2geneaffectingtheex
5、pressionofID1geneinendothelialprogenitorcells（EPCs）.MethodsMurineEPCsofbonemarrowshouldbeisolated,culturedandidentified.cDNAfragmentencodingmurineE2-2genewasamplifiedbyreversetranscriptase-polymerasechainreaction(RT-PCR).ThePCRamplifiedfragmentofE2-2genewasfirstclonedintopTG19-Tvector,andt
6、hensubclonedE2-2geneintotheshuttlevectorpAdTrack-CMVforconstructingtherecombinantplasmidspAdTrack/E2-2,whichhomologouslyrecombinatedwiththeadenoviralbackbonevectorsAdeasy-1togeneraterecombinantadenoviralplasmidsAd/E2-2.TherecombinantadenovirusesAd/E2-2,whichwereemployedtoinfectEPCs,weregen
7、eratedbytransfectingtherecombinantadenoviralDNAinto293cells.Theexpressionofenhancedgreenfluorescentprotein(EGFP)intransfectedEPCswereobservedunderinvertmicroscope.ThegrowthandproliferationoftransfectedEPCsweretestedviaCellcountkit-8(CCK-8),andtheexpreesionofE2
