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《蛇床子素對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷的保護(hù)作用與機(jī)制分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文ACE2）與血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（Angiotensinconvertingenzyme，ACE）作用相反，可下調(diào)血管緊張素II（angiotensinII，AngII）的表達(dá)，表明其是嚴(yán)重肺水腫和急性肺衰竭中關(guān)鍵的負(fù)性調(diào)節(jié)因子。因此，我們假設(shè)蛇床子素可能對(duì)急性肺損傷有保護(hù)作用，這種作用與ACE2的表達(dá)有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)擬觀察Ost對(duì)LPS所致小鼠急性肺損傷的保護(hù)作用，進(jìn)而深入研究其可能的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。實(shí)驗(yàn)?zāi)康模海?）觀察蛇床子素對(duì)LPS導(dǎo)致的ALI的保護(hù)作用（2）觀
2、察蛇床子素是否通過抑制ACE2和Ang(1-7)表達(dá)的下調(diào)進(jìn)而減輕LPS導(dǎo)致的ALI實(shí)驗(yàn)方法：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)為觀察Ost對(duì)LPS導(dǎo)致動(dòng)物死亡率的影響，成年雄性BALB/c小鼠（18~22g）采用腹腔注射脂多糖（50mg/kg）造成小鼠內(nèi)毒素血癥模型，并將其隨機(jī)分為4組：對(duì)照組（n=20）、LPS組（n=20）、Ost20mg/kg+LPS組（n=20）及Ost40mg/kg+LPS組（n=20）。在Ost20mg/kg+LPS組和Ost40mg/kg+LPS組，LPS注射前給予連續(xù)四天的Ost（20或4
3、0mg/kg）灌胃。小鼠注射LPS后，每6小時(shí)記錄一次小鼠的死亡情況，連續(xù)記錄72h。成年雄性BALB/c小鼠（18~22g）隨機(jī)分為4組，分別為：生理鹽水（NS）對(duì)照組（n=12），Ost對(duì)照組（n=12），LPS組（n=12）及Ost+LPS組（n=12）。在LPS組，給予小鼠氣管滴注LPS（5mg/kg）；NS組與Ost組，小鼠分別給予生理鹽水或蛇床子素灌胃；在Ost+LPS組，LPS氣管滴注前4天每天給予Ost灌胃（40mg/kg），最后一次灌胃后1小時(shí)給予LPS處理。在NS或LPS滴注后
4、6小時(shí)取小鼠右肺進(jìn)行病理觀察，檢測(cè)肺組織勻漿中血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）的mRNA及蛋白表達(dá)情況并檢測(cè)血管緊張素1-7[Ang(1-7)]的濃度，免疫組織化學(xué)觀察肺組織中ACE2與Ang(1-7)的表達(dá)情況，制備并測(cè)定小鼠支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolarlavagefluid，BALF）中蛋白的含量、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）及白介素-6（IL-6）的表達(dá)水平，取小鼠左肺，測(cè)肺濕/干重比值（W/D）。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)將大鼠肺泡巨噬細(xì)胞系NR8383細(xì)胞接種在96孔培養(yǎng)板（Ham’s
5、F12培養(yǎng)基與15%4第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文胎牛血清），培養(yǎng)至一定數(shù)量后換成無血清培養(yǎng)基，給予ACE2抑制劑DX-600(100nM)的情況下用50μg/ml的Ost處理4小時(shí)，然后用LPS（1μg/ml）刺激細(xì)胞12小時(shí)，收取上清液測(cè)定TNF-α和IL-6的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)為評(píng)估蛇床子素對(duì)小鼠內(nèi)毒素血癥的保護(hù)作用，在LPS注射前每天給予小鼠蛇床子素灌胃（20或40mg/kg），連續(xù)4天，預(yù)處理高劑量的蛇床子素（40mg/kg）后，小鼠3天的死亡率為45%，與LPS組（75%）相比，其死
6、亡率顯著降低（P<0.05）；而低劑量蛇床子素（20mg/kg）預(yù)處理組小鼠3天死亡率（65%）與LPS組無明顯差異（P=0.47）。以上數(shù)據(jù)表明Ost預(yù)處可明顯降低內(nèi)毒素血癥小鼠的死亡率，且其效果有劑量依賴性。因此采用40mg/kg的蛇床子素進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)研究。組織病理形態(tài)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，LPS組肺組織中充血與水腫明顯增多并有大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，而預(yù)處理Ost后可使LPS所致的肺損傷明顯減輕，肺組織結(jié)構(gòu)接近正常；同時(shí)，LPS組小鼠左肺W/D、肺泡灌洗液中蛋白含量、TNF-α和IL-6的表達(dá)相比于對(duì)
7、照組均與明的升高（P<0.05），但在Ost+LPS組上述指標(biāo)顯著降低（P<0.05）。在LPS組，小鼠肺組織勻漿中Ang(1-7)濃度為（142.4±5.905）ng/L，低于正常對(duì)照組（165.8±10.62）ng/L，而在Ost+LPS組升至（157.2±6.247）ng/L，與LPS組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。LPS組小鼠肺組織勻漿中ACE2mRNA表達(dá)低于正常對(duì)照組（P<0.05）；而在Ost+LPS組其表達(dá)量升高，與LPS組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。Westernblotting與免疫
8、組織化學(xué)結(jié)果顯示LPS能顯著降低肺組織中ACE2和Ang(1-7)的含量；而在Ost預(yù)處理后，ACE2和Ang(1-7)的減少程度明顯減輕。正常對(duì)照組與蛇床子素對(duì)照組之間無明顯差異。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示蛇床子素預(yù)處理可抑制LPS導(dǎo)致的細(xì)胞上清中TNF-a和IL-6含量的升高。但是加入ACE2抑制劑DX-600后，減弱了Osth抑制LPS導(dǎo)致的巨噬細(xì)胞細(xì)胞（NR8383）培養(yǎng)液上清中TNF-a和IL-6的升高作用。結(jié)論：（1）蛇床子素對(duì)LPS導(dǎo)致的小鼠急性肺損傷有保護(hù)作用。（2）蛇床子素
