抗氧化劑對新生大鼠高氧腦損傷的防治作用

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1、溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文抗氧化劑對新生大鼠高氧腦損傷的防治作用研究生：孟衛(wèi)霞導(dǎo)師：錢燕主任，林蓮蓮教授，陳超教授溫州醫(yī)學(xué)院，溫州，浙江325003中又捅要目的l、探討持續(xù)吸入高濃度氧造成新生大鼠腦損傷的機(jī)制；2、探討并比較抗氧化劑丹參764—3和SOD對高氧損傷后新生大鼠腦的保護(hù)作用。方法1、模型和分組新生Sprague-Dawley大鼠出生6h內(nèi)即置于02濃度≥90％的自制氧艙中，隨機(jī)分為6大組，分別為高氧對照組、空氣對照組、SOD預(yù)防組、SOD治療組、丹參預(yù)防組、丹參治療組。其中預(yù)防組又分為7d預(yù)防組和14d預(yù)防組(前者是指持續(xù)吸入高氧滿7d即處死取標(biāo)本，后者是指持續(xù)吸

2、入高氧滿14d后處死)。調(diào)整各組新生大鼠數(shù)目，每組在8～16只之間。據(jù)Felderhoff—mueser【1J的報(bào)道，生后3～7d是新生鼠腦最易受高氧損傷的時(shí)期，故將l'--'7d用藥組稱為預(yù)防組，7～14d用藥組作為治療組。給藥方法為每日清晨7時(shí)給藥一次，高氧對照組與空氣對照分別于生后相同的時(shí)間段腹腔注射等量的生理鹽水。用藥劑量：丹參為40mg／kg·d，SOD為2000U／kg·d。2、標(biāo)本采集與檢測每天記錄新生大鼠的成活率、體重及狀態(tài)。高氧對照組、空氣對照組分別在生后滿3d、7d、14d，余下4大組分別在生后滿7d、14d，予t0％水合氯醛腹腔麻醉后，取出腦組織，立

3、即置于4％多聚甲醛固定液中，常規(guī)石蠟包埋，取海馬水平做冠狀切片，厚度為5Ilm，用于HE染色、免疫組化和TUNEL檢測并計(jì)算凋亡指數(shù)(甜)。記錄部分腦組織濕重與經(jīng)冷凍干燥后干重，以計(jì)算腦濕／干重比值。結(jié)果1、存活率、體重、腦濕重／干重比值4組高氧對照組的存活率、體重均低于對應(yīng)的空氣對照組，其中高氧預(yù)防對照組14d和高氧治療對照組14d差異顯著(P

4、3預(yù)防組7d和SOD治療組14d作用顯著(P<0．05或P<0．01)，提示它能顯著改善腦神經(jīng)細(xì)胞水腫，減輕腦神經(jīng)細(xì)胞損傷。2、腦H-E染色光鏡下：高氧對照組腦組織神經(jīng)元出現(xiàn)變性，表現(xiàn)為胞漿呈均勻的粉紅色嗜酸性染色，細(xì)胞皺縮，部分細(xì)胞核深染，核仁不清。正常對照組幾乎未見變性細(xì)胞，3d、7d組病變主要集中在大腦皮層，呈層狀、灶2溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文狀改變。外側(cè)較內(nèi)側(cè)明顯，吸氧時(shí)問達(dá)14d時(shí)，病變開始累及海馬區(qū)、齒狀回，損傷程度隨吸氧時(shí)問延長而有所加重。小腦累及不明顯，中央白質(zhì)、黑質(zhì)、紅核僅見少許散在的變性細(xì)胞，其它部位如紋狀體、蒼白球、丘腦均未見明顯異常改變。使用抗氧化劑

5、后神經(jīng)元變性有所改善，尤以丹參7d預(yù)防組為甚。3、血管內(nèi)皮生長因子免疫組化染色結(jié)果空氣對照組可見血管內(nèi)皮生長因子(Vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)陽性表達(dá)于皮質(zhì)、海馬和皮質(zhì)下結(jié)構(gòu)。其中在皮層、海馬區(qū)為弱陽性，在皮質(zhì)下區(qū)為強(qiáng)陽性表達(dá)，陽性著染細(xì)胞為神經(jīng)元，表達(dá)于核周胞漿和主樹突，胞核為陰性表達(dá)。在脈絡(luò)叢的血管內(nèi)皮細(xì)胞為陽性表達(dá)，胞漿著染，胞核為陰性。空氣對照組VEGF表達(dá)明顯高于高氧對照組，且隨時(shí)間延長差異增大，至7d時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尺0．01)。高氧對照組與藥物干預(yù)組相比，藥物干預(yù)組VEGF表達(dá)高于高氧對照組，以丹參預(yù)防組7d

6、表達(dá)最多(尺0．05)，其次是丹參治療組14d(尺0．05)和SOD治療組14d(尺O．05)，其他組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4、凋亡指數(shù)高氧對照組腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯高于相對應(yīng)的空氣對照組(尺O．01)。3d、7d時(shí)凋亡細(xì)胞主要集中在大腦皮層，吸氧時(shí)間達(dá)14d時(shí)，病變開始累及海馬區(qū)、齒狀回。用藥組凋亡指數(shù)與高氧對照組相比均明顯下降且差異顯著(P(O．01)，按凋亡指數(shù)由高到低的排列順序?yàn)镾OD預(yù)防7d組>丹參預(yù)防7d組；14d組中凋亡指數(shù)的排列順序是丹參預(yù)防14d組>SOD預(yù)防14d組>SOD治療14d組>丹參治療14d組，與VEGF表達(dá)的高低順序剛好相反。5、VE

7、GF表達(dá)情況與凋亡指數(shù)問關(guān)系將參與本次實(shí)驗(yàn)的所有藥物干預(yù)組和7d、14d的高氧對照組大鼠共77只(即不包括所有的空氣對照組和3d的高氧對照組)，分別按VEGF表達(dá)陽性(39只)和陰性(38只)分為二組來統(tǒng)計(jì)凋亡指數(shù)，可以看出VEGF表達(dá)陽性組凋亡指數(shù)為16．79±12．13(％)較低，VEGF表達(dá)陰性組凋亡指數(shù)為39．39±20．09(％)則較高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尺O．01)。結(jié)論l、持續(xù)吸入高氧(>／90％02)3～7d后大鼠生存率、體重有所下降，腦濕重／干重比值和腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著上升，提示高氧可以造成新生鼠腦損傷