SB203580防治大鼠高氧肺損傷的作用與機(jī)制.doc

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1、SB203580防治大鼠高氧肺損傷的作用與機(jī)制【摘要】　　目的：探討p38絲裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)特異性抑制劑SB203580對(duì)新生大鼠高氧肺損傷產(chǎn)生保護(hù)作用的機(jī)制.方法：160只新生大鼠隨機(jī)分為空氣對(duì)照組、高氧肺損傷組、高氧肺損傷+SB203580組和高氧肺損傷+生理鹽水組，建立模型.作用12,24,72h和1echanismofprotectionfromhyperoxiainducedlunginjuryinnechloridegrouprandomly.Atthetimepointsof

2、12,24,72hand1epointof72hepointepointof72h,p38MAPKchloridegroup;inthetegoingon.Andateachtimepoint,theirconcentrationsentofSB203580throughblockingtheexpressionsofp38MAPK,theninhibitingtheexpressionofIL8andTGFβ1.　　【Keyitogenactivatedproteinkinase;IL8;TGFβ

3、1　　0引言　　我們?cè)谇捌谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)，大鼠長(zhǎng)時(shí)間暴露于高氧環(huán)境后，p38絲裂素活化蛋白激酶（p38mitogenactivatedproteinkinase,p38MAPK）得以激活并介導(dǎo)了急性肺損傷，p38MAPK特異性抑制劑SB203580對(duì)這種損傷具有明顯的保護(hù)作用［1］，但具體的機(jī)制尚不清楚.有研究表明，白介素8（interleukin8,IL8）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（transforminggroa公司）;IL8和TGFβ1ELISA檢測(cè)試劑盒（美國(guó)Mega診斷試劑有限公司）.　　1.2

4、方法　　1.2.1分組及建?！　⒋笫箅S機(jī)分為4組：空氣對(duì)照組、高氧肺損傷組、高氧肺損傷+SB203580組及高氧肺損傷+生理鹽水組，每組40只.所有高氧肺損傷組置于常壓高氧倉(cāng)中，氧體積分?jǐn)?shù)>0.95，CO2體積分?jǐn)?shù)≤0.05；空氣對(duì)照組置于同一室內(nèi)，空氣中氧體積分?jǐn)?shù)為0.21.高氧肺損傷+SB203580組從高氧暴露第1日開始，給予SB203580（配制成10μmol/L）5mg/kg腹腔注射，1/d，共3d.高氧肺損傷+生理鹽水組給予生理鹽水5mg/kg腹腔注射，1/d，共3d.所有高氧肺損傷組每天

5、開倉(cāng)1次，添加水及墊料，并將母鼠置于空氣中休息1h,累計(jì)連續(xù)暴露于高氧環(huán)境72h.以上4組環(huán)境溫度均控制在21~25℃，濕度60%~70%.　　1.2.2標(biāo)本制備　　于12，24，72h和1in，13000g高速離心20min，取上清液.　　1.2.3APK抗體（1∶500），4℃過夜.TBST洗滌3次（15min/次），加入HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG（1∶500），37℃孵育1h，TBST洗滌3次（15min/次），DAB染色，適時(shí)終止.1.2.4ELISA法檢測(cè)IL8和TGFβ1的含量取4個(gè)時(shí)相點(diǎn)的右肺

6、勻漿離心后的上清液為待測(cè)樣品.嚴(yán)格按試劑盒說明書操作.在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定A值，根據(jù)吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線中換算樣品中IL8和TGFβ1的含量.　　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：計(jì)量資料以x±s表示，采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS11.0進(jìn)行分析，組間比較用非參數(shù)秩和檢驗(yàn),P<0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.　　2結(jié)果　　2.1APK的表達(dá)72h后，空氣對(duì)照組未見p38MAPK表達(dá)，高氧肺損傷組可見p38MAPK表達(dá)；高氧肺損傷+生理鹽水組p38MAPK表達(dá)明顯強(qiáng)于高氧肺損傷+SB203580組（圖1）.　　2.2ELISA法檢測(cè)IL

7、8和TGFβ1的表達(dá)　　在高氧肺損傷組和高氧肺損傷＋生理鹽水組中，肺組織IL8和TGFβ1濃度均隨時(shí)間延長(zhǎng)呈持續(xù)上升趨勢(shì)；在各個(gè)時(shí)相點(diǎn)，高氧肺損傷組和高氧肺損傷＋生理鹽水組IL8和TGFβ1濃度均高于空氣對(duì)照組和高氧肺損傷＋SB203580組（P<0.01，表1）.表1不同處理組新生大鼠右肺IL8和TGFβ1含量測(cè)定（略）　　3討論　　IL8亦稱中性粒細(xì)胞趨化和激活蛋白1（NAP1），主要由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，在肺部，還可由中性粒細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞等產(chǎn)生.LPS，

8、TNFα和IL1β等是IL8分泌的誘導(dǎo)劑.在高氧肺損傷的急性炎癥期，肺泡巨噬細(xì)胞等分泌的TNFα，IL1β，IL8和IL6明顯增加；隨著高氧時(shí)間的暴露，TNFα，IL1β和IL6的表達(dá)逐漸下降，但I(xiàn)L8仍然處于高水平.IL8是具有強(qiáng)活性的中性粒細(xì)胞趨化因子，它可以導(dǎo)致中性粒細(xì)胞的大量激活、遷徙并聚集于肺部，在高氧肺損傷中起著極為重要的作用［7］.體外研究表明，IL8呈劑量依