奧美拉唑逆轉(zhuǎn)人肺腺癌耐順鉑細(xì)胞株a5492fddp耐藥性研究

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1、。!ljj·]目錄中文摘要???????????????????????????1英文摘要???????????????????????????3研究論文奧美拉唑逆轉(zhuǎn)人肺腺癌耐順鉑細(xì)胞株A549／DDP耐藥性研究前言”·OOO”“”””?”“”””．．”“”““一“”一““一一一”“”·OOMOO一·6刖吾”‘”“”””?”“”””””“”““一“”一““一一一”“”。一。材料與方法????????????????????????7結(jié)果?OOOO?????????????????OOWO0??17附圖??????????????g0Ooo??????DOOOO??

2、20附表??????????OOOO00?????????OoOooOO00?一·29討論································?···················一··一·““一·一””一”31結(jié)論?······································一?”·”一““”．．“一一“”一””·37參考文獻(xiàn)????????????????????????38綜述V-ATPase與腫瘤的關(guān)系及研究進(jìn)展????????????42致謝·”?一一””一””一”“?一““一”“一“一一““一””一””??一“”一“?52

3、個(gè)人簡(jiǎn)歷??????????????????????????53＼．l，；。rj__·1．．●■●■■‘．—一中文摘要奧美拉唑逆轉(zhuǎn)人肺腺癌耐順鉑細(xì)胞株A549／DDP耐藥性研究摘要目的：本實(shí)驗(yàn)研究V-ATPase非特異性抑制劑一奧美拉唑逆轉(zhuǎn)人肺腺癌耐藥株A549／DDP細(xì)胞耐藥性作用及可能機(jī)制。方法：選用人肺腺癌耐藥株A549／DDP為研究對(duì)象，采用MTT法測(cè)定順鉑(DDP)對(duì)A549及A549／DDP細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)，以此判斷A549／DDP細(xì)胞的耐藥性情況。采用MTT法確定奧美拉唑(Omerprazole，簡(jiǎn)稱OME)非細(xì)胞毒性劑量：取低于10％

4、抑制濃度(inhibitingconcentration，IClo)作為藥物作用濃度：OME499／ml。在此濃度逆轉(zhuǎn)劑作用下測(cè)定順鉑對(duì)A549／DDP細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)，以此判斷OME對(duì)耐藥細(xì)胞藥物敏感性的影響。光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。運(yùn)用流式細(xì)胞儀(Flowcytometry，F(xiàn)CM)測(cè)定加入逆轉(zhuǎn)劑后對(duì)A549／DDP細(xì)胞株的細(xì)胞周期影響。運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)有無逆轉(zhuǎn)劑作用下A549／DDP細(xì)胞中Bcl．2和PTEN蛋白表達(dá)的情況。應(yīng)用激光掃描共聚焦顯微鏡(LaserScanningConfocalMicroscopy，LSCM)檢測(cè)OME處理

5、前后細(xì)胞內(nèi)BCECF．AM(pH探針)熒光強(qiáng)度的變化，間接反映細(xì)胞內(nèi)pH之變化。采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(ReverseTranscriptionPolymemseChainReaction，RT-PCR)檢測(cè)V-ATPasemRNA在人肺腺癌細(xì)胞株A549細(xì)胞和耐順鉑細(xì)胞株A549／DDP中表達(dá)情況。采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)有無逆轉(zhuǎn)劑作用下A549／DDP細(xì)胞中Bcl．2mRNA和PTENmRNA表達(dá)的情況。結(jié)果：MTr法測(cè)定DDP對(duì)A549細(xì)胞的IC50為1．9rtg／ml，DDP對(duì)A549／DDP細(xì)胞的IC50為43．499／ml。OME對(duì)A54

6、9／DDP細(xì)胞的IClo為8．7pg／ml。選取非細(xì)胞毒作用濃度為4I_tg／ml的OME為逆轉(zhuǎn)劑，在經(jīng)逆轉(zhuǎn)劑預(yù)處理24h情況下，DDP對(duì)A549／DDP細(xì)胞的IC50由43．41xg／ml降至30．1肛∥ml，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)約為1．44，與無逆轉(zhuǎn)劑組相比具有顯著性差異(P

7、，G1期細(xì)胞明顯增多，S期細(xì)胞則相對(duì)減少，與無逆轉(zhuǎn)劑組相比具有顯著性差異(P

8、99，二者