caspase+8在trail死亡受體途徑中誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞凋亡的作用

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1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人申明所里交的學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。，據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料，與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意．申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任．論文作者簽名：醛整堡日期：竺至二-可中國(guó)醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解中國(guó)醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即：研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)

2、單位屬中國(guó)醫(yī)科大學(xué)．本人保證畢業(yè)高校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位為中國(guó)醫(yī)科大學(xué)，且導(dǎo)師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國(guó)醫(yī)科大學(xué)．學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱．學(xué)校可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容(保密內(nèi)容除外)，以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名：叢壟堡指導(dǎo)教師簽名：簽邀雛(一面鬲麗i]Caspase8在TRAIL一死亡受體途徑中誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞凋亡的作用前言與目的神經(jīng)母細(xì)胞瘤(neuroblastoma，NB)是兒童常見(jiàn)的顱外實(shí)體瘤，年齡超過(guò)1歲、伴隨1號(hào)染色體短臂雜合性缺

3、失、有N—MYC擴(kuò)增的NB患兒預(yù)后不良，且對(duì)目前療法包括外科手術(shù)、化療、干細(xì)胞移植等的療效不是十分理想，其中對(duì)傳統(tǒng)化療耐藥和腫瘤轉(zhuǎn)移擴(kuò)散是臨床面臨的主要難題。因此臨床上不斷探索新的抗腫瘤方法，通過(guò)激活腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(tumornecrosisfactorrelatedapoptosisinducingligand，TRAIL)途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡可能成為NB治療的一個(gè)熱點(diǎn)。TRAIL的選擇性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的特性使其具有良好的臨床應(yīng)用前景，而且已有眾多研究報(bào)道TRAIL與1一干擾素

4、高各種耐藥的腫瘤細(xì)胞對(duì)TRAIL的敏感性。TRAIL是腫瘤壞死因子(TNF)超家族中的一員，與TNF、FASL(FAS配體)不同的是TRAIL能誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞與轉(zhuǎn)化細(xì)胞發(fā)生凋亡而對(duì)正常細(xì)胞無(wú)誘導(dǎo)凋亡作用。正常情況下，TRAIL粘附于5個(gè)受體，死亡受體(deathreceptor，DR)DR4、DR5，誘捕受體(decoyreceptor，DcR)DcRl、DcR2及護(hù)骨素(osteoprotegerin，OPG)，誘捕受體與死亡受體相似，但缺乏功能性細(xì)胞內(nèi)死亡區(qū)域，不引起凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)。TRAIL通過(guò)黏附于死亡受體啟動(dòng)半胱一天冬氨酸蛋白酶(cysteinec

5、ontainingasparatespecificprotease，Caspase)級(jí)聯(lián)反應(yīng)導(dǎo)致程序化細(xì)胞死亡。在這一過(guò)程中死亡受體的活化導(dǎo)致Caspase8的激活，通過(guò)細(xì)胞內(nèi)一種叫做FAS相關(guān)蛋白的細(xì)胞內(nèi)媒介蛋白，活化的Caspase8直接激活效應(yīng)Caspase—Caspase3，引起NB細(xì)胞凋亡。大多數(shù)NB細(xì)胞株因其Caspase8表達(dá)的缺失而對(duì)TRAIL誘導(dǎo)的凋亡不敏感。NB細(xì)胞中Caspase8基因沉寂的原因是其啟動(dòng)子區(qū)域高度甲基化，如何恢復(fù)NB細(xì)胞中Caspase8的表達(dá)及其對(duì)TRAIL的敏感性成為當(dāng)前NB研究的一個(gè)熱點(diǎn)問(wèn)題。本研究中我們用去甲基藥

6、5氮雜胞苷(5一Aza．cytidine，5AZA)、IFN叭TRAIL及化療藥聯(lián)合作用于NB細(xì)胞株CHP212、SH—SY5Y(SY5Y)、SKNDZ，探討NB細(xì)胞對(duì)TRAIL抵抗的分子機(jī)制，以及聯(lián)合用藥是否可以克服腫瘤耐藥性，為TRAIL的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法1．RT—PCR檢測(cè)5AZA、IFNl作用前后Caspase8mRNA的表達(dá)及IFN7作用前后TRAIL、TRAIL受體DR5和其它凋亡相關(guān)基因的表達(dá)。2．細(xì)胞免疫組化方法及免疫印記實(shí)驗(yàn)(Western—blot)檢測(cè)5AZA、IFNl作用前后Caspase8蛋白的表達(dá)；并用Western—b

7、lot技術(shù)檢測(cè)CHP212、SYSY、SKNDZ細(xì)胞DR5蛋白的表達(dá)及化療藥處理后SKNDZ細(xì)胞DR5蛋白的表達(dá)。3．MTr細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)分組如下：(1)以5斗mol／L5AZA培養(yǎng)5d的SY5Y細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組，未用藥物處理的細(xì)胞為對(duì)照組，分別給予0、50、100和200／xg／LTRAIL處理12、24和48h。同時(shí)設(shè)抑制劑組(5卜mol／L5AZA處理5d后，先加Caspase8抑制劑zlETD—FMK預(yù)處理1h后再用不同濃度TRAIL處理24h)。(2)CHP212細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分3組：不同濃度TRAIL處理24h組；100肛g／LTRAIL作用不同時(shí)間組；Cas

8、pase8抑制劑組。SY5Y細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分4組：?jiǎn)斡貌煌?/p>