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《notch1在肝癌組織中的表達(dá)及其對肝癌細(xì)胞侵襲能力的影響》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文Notch1在肝癌組織中的表達(dá)及其對肝癌細(xì)胞侵襲能力的影響碩士研究生：張勇導(dǎo)師：王德盛副教授第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院肝膽胰脾外科，西安710032資助基金項目：國家自然科學(xué)基金（No.30872480）陜西省科技研究發(fā)展計劃項目（No.2012SF2-09-1）中文摘要關(guān)鍵詞：原發(fā)性肝癌；Notch1；侵襲轉(zhuǎn)移；基質(zhì)金屬蛋白酶原發(fā)性肝癌是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，在我國，原發(fā)性肝癌是排名第二的致死性腫瘤疾病，每年大約有11萬-13萬患者死于肝細(xì)胞性肝癌，占全球肝癌患者死亡人數(shù)的45%。隨著現(xiàn)代檢測及治療手段的進(jìn)步，原
2、發(fā)性肝癌治療取得了長足進(jìn)展，但由于其較高的轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)率，總體預(yù)后依舊較差，積極尋找一種早期準(zhǔn)確預(yù)測肝細(xì)胞肝癌惡性程度及預(yù)后的指標(biāo)變得十分迫切。Notch信號通路是一條進(jìn)化上十分保守的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，可調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、凋亡等生物學(xué)行為。其主要由受體、配體、DNA結(jié)合蛋白三部分組成。在胞漿內(nèi)生成的Notch受體在高爾基體中經(jīng)Furin類轉(zhuǎn)化酶水解為兩部分，二者之間通過非共價鍵形成異源二聚體并被轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞膜表面，當(dāng)受體與配體結(jié)合后，在γ-分泌酶的水解作用下，切割Notch受體跨膜區(qū)，并釋放Notch胞內(nèi)段進(jìn)入細(xì)胞核，從而啟動下游基因的轉(zhuǎn)錄，調(diào)控一
3、系列生命活動。Notch1是Notch信號通路的跨膜受體之一，大量研究發(fā)現(xiàn)，Notch1在多種腫瘤中異常表達(dá)，并且與腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移相關(guān)。但在肝癌中，-2-第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文Notch1的作用尚不明確。目的：研究Notch1在肝細(xì)胞肝癌組織中的表達(dá)情況及其與肝癌臨床病理特征的關(guān)系。檢測不同侵襲能力肝腫瘤及非腫瘤細(xì)胞系中Notch1的表達(dá)情況，設(shè)計合成特異性Notch1-siRNA，研究Notch1在肝癌細(xì)胞系MHCC97-H及HepG2侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及其相關(guān)潛在機(jī)制。方法：用免疫組織化學(xué)法(SP法)檢測110例肝癌組織及其癌旁組織中No
4、tch1表達(dá)情況，并分析Notch1表達(dá)與肝癌各項臨床病理指標(biāo)之間的相關(guān)性。用Westernblot方法檢測肝非腫瘤細(xì)胞系HL-7702、肝癌細(xì)胞系HepG2和MHCC97-H三種不同侵襲能力的細(xì)胞系中Notch1蛋白的表達(dá)情況，設(shè)計并合成針對Notch1基因特異性的小干擾RNA（smallinterferingRNA,siRNA）,采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染MHCC97-H及HepG2兩種肝癌細(xì)胞系，通過Westernblot及實時定量PCR法分別檢測轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞Notch1蛋白和mRNA表達(dá)水平的變化。應(yīng)用特異性Notch1-siRNA轉(zhuǎn)染的Hep
5、G2及MHCC97-H細(xì)胞，體外通過transwell小室基質(zhì)侵襲實驗，觀察Notch1表達(dá)沉默之后，這兩種肝癌細(xì)胞系侵襲能力的變化，并應(yīng)用Westernblot及ELISA的方法分別檢測兩種細(xì)胞系轉(zhuǎn)染前后MMP-2及MMP-9表達(dá)量以及活性的變化情況。結(jié)果：免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)，Notch1陽性染色主要位于細(xì)胞膜中，為棕色及棕黃色顆粒樣，細(xì)胞漿中也有所表達(dá)。在肝癌組織中，30例（27.3%）陰性表達(dá)，32例（29.1%）弱陽性表達(dá)，21例（19.1%）中等陽性表達(dá)，27例（24.5%）強(qiáng)陽性表達(dá)。Notch1在肝癌組織中表達(dá)存在差異。在癌旁
6、組織中，僅部分染色顯示為弱陽性，其余均為陰2性。肝癌組織中Notch1的陽性表達(dá)與肝癌的AJCC分期（χ=22.123，P<0.001）、門22靜脈癌栓（χ=9.068，P=0.003）這些因素存在正相關(guān)性,與肝癌的分化程度（χ=6.490，22P=0.011）存在負(fù)相關(guān)性；而與肝癌患者的性別（χ=0.490，P=0.484）、年齡（χ=0.188，22P=0.664）、腫瘤直徑（χ=0.002，P=0.961）、腫瘤數(shù)量（χ=2.220，P=0.136）、AFP2表達(dá)量（χ=1.392，P=0.238）這些因素?zé)o關(guān)。相比肝非腫瘤細(xì)胞系，No
7、tch1在兩種肝癌細(xì)胞系中均高表達(dá)。特異性Notch1-siRNA轉(zhuǎn)染MHCC97-H以及HepG2后，通過westernblot和實時定量PCR的方法-3-第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文檢測發(fā)現(xiàn)這兩種肝癌細(xì)胞系中Notch1蛋白以及mRNA的表達(dá)均顯著下降，該siRNA可以成功的干涉Notch1的表達(dá)。應(yīng)用特異性Notch1-siRNA沉默肝癌細(xì)胞系MHCC97-H及HepG2中Notch1的表達(dá)，侵襲實驗結(jié)果顯示：Notch1-siRNA組兩種細(xì)胞系穿透小室膜的細(xì)胞數(shù)目明顯減少。Westernblot及ELLISA實驗檢測發(fā)現(xiàn)，Notch1-s
8、iRNA組兩種細(xì)胞的MMP-2及MMP-9的表達(dá)和活性均降低。結(jié)論：Notch1參與了肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的調(diào)控過程，特異性的Notch1-siRNA可以抑制肝癌細(xì)胞系MH
