產(chǎn)葉酸菌株篩選、生物學(xué)特性的研究和發(fā)酵條件優(yōu)化

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1、浙江工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文產(chǎn)葉酸菌株的篩選、生物學(xué)特性研究和發(fā)酵條件優(yōu)化姓名：徐玲燕申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：食品科學(xué)指導(dǎo)教師：孟祥河201204浙江工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文產(chǎn)葉酸菌株的篩選、生物學(xué)特性研究和發(fā)酵條件優(yōu)化產(chǎn)葉酸菌株的篩選、生長特性的研究和發(fā)酵條件優(yōu)化摘要本研究從土壤、菠菜和水中選擇性篩選得到120株菌株，進行產(chǎn)葉酸菌株的定性篩選，得到了34株產(chǎn)葉酸的菌株，再用高效液相色譜法進行定量分析，確定6株葉酸產(chǎn)量相對較高的菌株，命名為Ra．1、Ra一10、Ra．18、Rb一8、Rc一6、Sc一1。通過生理生化試

2、驗，16SrcINA序列系統(tǒng)和發(fā)育樹分析，將測得的上述序列在GenBank中進行Blast同源性搜索，結(jié)果顯示菌株Ra．1、Ra一10、Ra．18、Rb．8、Rc．6與植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)的同源性達到了99％．100％，確定為植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)；Sc一1與嗜熱鏈球菌(Streptococcusthermophilus)的同源性達到了99％一100％，確定為嗜熱鏈球菌(Streptococcusthermophilus)。葉酸的檢測方

3、法很多，本實驗選用了高效液相色譜和熒光檢測法(高錳酸鉀和雙氧水)，比較了這三種方法的優(yōu)缺點，結(jié)果顯示高效液相色譜法檢測O．65pg／mL葉酸標準溶液的準確率為98．9％，高錳酸鉀氧化熒光法為98％，雙氧水氧化熒光法相對較低，為94．2％；考慮實驗的操作性，高錳酸鉀熒光檢測結(jié)果與高效液相色譜法檢測結(jié)果更接近，準確性和穩(wěn)定性高，故實驗采用高錳酸鉀熒光法檢測葉酸濃度。同時研究6株菌的生長動力學(xué)特性，得出各菌株最適生長溫度，乳酸菌屬為37℃，嗜熱鏈球菌為30℃。將各菌株分別在最適生長的條件下培養(yǎng)，分別測定胞內(nèi)和胞外的

4、葉酸含量，此時胞內(nèi)葉酸產(chǎn)量是胞I浙江工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文產(chǎn)葉酸菌株的篩選、生物學(xué)特性研究和發(fā)酵條件優(yōu)化外葉酸量的2倍左右，由于6株菌最佳胞內(nèi)葉酸產(chǎn)量的時間跟胞外葉酸的最高產(chǎn)時間不～致，綜合考慮了實驗操作的可行性和降低成本，且發(fā)酵液可大量收集得到胞外葉酸，因而本實驗后期主要研究了菌株胞外產(chǎn)葉酸的質(zhì)量濃度優(yōu)化。在不同的培養(yǎng)條件下，加入優(yōu)化物質(zhì)的情況下比較產(chǎn)葉酸能力，進行單因素試驗和正交分析，同時重復(fù)試驗3次，分析得出各菌種的最佳發(fā)酵產(chǎn)葉酸條件。結(jié)果顯示，菌株Ra一1的最佳產(chǎn)葉酸條件是葡萄糖259／L，檸檬酸銨49

5、／L，P．A。BA0．39／L，接種量2％，培養(yǎng)時間24h，初始pH6．5，葉酸產(chǎn)量達到了1．92Bg／mL；菌株Ra-10產(chǎn)葉酸的最佳反應(yīng)條件為：葡萄糖209／L，檸檬酸銨49／L，，PABA0．39／L，接種量3％(v／v)，培養(yǎng)時間48h，初始pH6．0，葉酸產(chǎn)量為1．7899／mL；菌株Ra．18產(chǎn)葉酸的最佳反應(yīng)條件為：葡萄糖209／L，蛋白胨39／t,，PABA0．39／L，接種量2％(v／v)，培：養(yǎng)時間24h，初始pH6．0，葉酸產(chǎn)量為1．4199／mL；菌株Rb一8產(chǎn)葉酸的最佳反應(yīng)條件為：蔗糖

6、209／L，檸檬酸銨49／L，PABAO．59／L，接種量3％(v／v)，：暗養(yǎng)時間48h，初始pH6．5，葉酸產(chǎn)量為1．2799／mL；菌株Rc一6產(chǎn)葉酸的最佳反應(yīng)條件為：葡萄糖259／L，酵母粉49／L，PABA0．39／L，接種量3％(v／v)，培養(yǎng)時間48h，初始pH6．5，葉酸產(chǎn)量為1．27I，tg／mL；菌株Sc一1最佳產(chǎn)葉酸條件是蔗糖259／L，檸檬酸銨29／L，PA。BA0．39／L，接種量2％，培養(yǎng)時間48h，初始pH5．5，葉酸產(chǎn)量為1．31gg／mL。關(guān)鍵詞：乳酸菌，嗜熱鏈球菌，葉酸，優(yōu)

7、化，生物學(xué)特性，檢測方法浙江工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文產(chǎn)葉酸菌株的篩選、生物學(xué)特性研究和發(fā)酵條件優(yōu)化SCREENlNGoFFoLlCACIDPRODUCINGSTRAINS，STUDYoNITSBloLoGICALCHARACTERISTICSANDOPTIMlZATIoNOFFERMENTATIONCoNDITIoNABSTRACTThepapermainlyfocusedonscreeningoffolicacid—producingstrains，&omthesoil，spinachandwater．Afte

8、rqualitativescreeningfolicacid—producingstrains，34strains，whichhavetheabilityofproducingfolicacid，wereobtained．Sixstrains，namedRa一1，Ra一10，Ra一18，Rb一8，Rc一6andSc一1，producingrelativelyhighfolicacidweresele