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1、中圖分類號(hào)：碩士學(xué)位論文雌激素通過(guò)MAPK信號(hào)通路刺激內(nèi)皮祖細(xì)胞的增值和遷移院（系）、所臨床醫(yī)學(xué)院研究生姓名尹華曦學(xué)科、專業(yè)內(nèi)科學(xué)導(dǎo)師姓名劉應(yīng)才教授1目錄1雌激素通過(guò)MAPK信號(hào)通路刺激內(nèi)皮祖細(xì)胞增值和遷移???????????????????????11.1中文摘要????????????????????11.2英文摘要????????????????????51.3前言??????????????????????101.4材料與方法???????????????????131.5結(jié)果?????
2、?????????????????191.6討論??????????????????????291.7結(jié)論??????????????????????381.8參考文獻(xiàn)????????????????????391.9英漢縮略詞對(duì)照表????????????????462致謝??????????????????????473內(nèi)皮祖細(xì)胞與MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路（綜述）????????????????????????482雌激素通過(guò)MAPK信號(hào)通路刺激內(nèi)皮祖細(xì)胞的增值和遷移摘要目的：觀察絲裂原活化蛋白激
3、酶（MAPK）及其亞族細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（extracellular-signalregulatedproteinkinaseERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）/應(yīng)激激活蛋白激酶（SAPK）、p38在雌激素刺激內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）遷移和增值中的作用。方法：（1）單個(gè)核細(xì)胞的分離：用50U/ml肝素2ml潤(rùn)濕空針后抽取臍帶血約50ml，加入3%明膠16ml（臍帶血:明膠=3:1）沉淀后加入人淋巴細(xì)胞分離液用密度梯度離心法分離出單個(gè)核細(xì)胞，活力計(jì)算活性達(dá)98%可以接種。（2）誘導(dǎo)分化：成纖維
4、細(xì)胞多于24小時(shí)內(nèi)貼壁，因此培養(yǎng)24小時(shí)后取未62貼壁細(xì)胞以4×10/cm接種于包被有纖維連接蛋白的24孔培養(yǎng)板(每孔lml)，每孔中加入M199培養(yǎng)液lml，添加10%胎牛血清、1%青鏈霉素(1萬(wàn)單位/ml)、VEGF（50ng/ml），置于5%CO2、飽和濕度37℃孵育箱中培養(yǎng)，換培養(yǎng)液培養(yǎng)至7d，貼壁細(xì)胞供實(shí)驗(yàn)用。（3）EPCs鑒定：培養(yǎng)細(xì)胞爬片后，然后分別加入鼠抗人CD133單克隆抗體(1:100稀釋)、DiI-ac-LD、FITC-UEA-1分別在倒置相差顯微鏡及免疫熒光顯微鏡下觀察拍照
5、。（4）實(shí)驗(yàn)分組：本實(shí)驗(yàn)共分五組，分別為對(duì)照組：正常培養(yǎng)EPCs未加入任何藥物；雌二醇（E2）組：EPCs培養(yǎng)7天后加入E2；PD98,059(ERK抑制劑)組：培養(yǎng)7天后先用PD98,059作用細(xì)胞24h再加入E2；SP600125（JNK抑制劑）組：培1養(yǎng)7天后先用SP600125作用細(xì)胞24h再加入E2；SB203580（p38抑制劑）組：培養(yǎng)7天后先用SB203580作用細(xì)胞24h再加入E2。（5）觀測(cè)指標(biāo)：①酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀檢測(cè)各組活細(xì)胞數(shù)（結(jié)果以吸光值表示）。②選取特定濃度用流式細(xì)胞檢測(cè)
6、儀分析各組細(xì)胞周期變化。③將細(xì)胞懸液種在Traswell小室上層，下層加入趨化因素，觀察由上層小室遷入下層小室的細(xì)胞數(shù)。結(jié)果：（1）單個(gè)核細(xì)胞分離：從臍帶血中分離的單個(gè)核細(xì)胞在顯微鏡下呈圓形、透亮，臺(tái)盼藍(lán)染色顯示存活率>95%。（2）EPCs鑒定：取培養(yǎng)第7天的細(xì)胞做免疫熒光檢測(cè)CD133呈綠色，陽(yáng)性率達(dá)95%以上。取培養(yǎng)第9天的細(xì)胞檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞特異性抗體Dil-ac-LDL呈紅色，F(xiàn)ITC-UAE-1呈綠色，Dil-ac-LDL和FITC-UAE-1雙染的細(xì)胞為EPCs呈現(xiàn)黃色。染色結(jié)果顯示黃色
7、細(xì)胞>90%。（3）酶聯(lián)免疫檢測(cè)活細(xì)胞數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：對(duì)照組的吸光值為0.4163±0.0503，E2組吸光值為0.6940±0.0143，與對(duì)照組相比有顯著意義（P<0.05），說(shuō)明E2可以引起EPCs增值；PD98,059在5umol/L、10umol/L、20umol/L、40umol/L、80umol/L吸光值分別為0.7406±0.0376、0.6177±0.1043、0.5211±0.0793、0.5032±0.0975、0.4522±0.0406，與E2組比較PD98,059在20umo
8、l/L、40umol/L、80umol/L時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明PD98,059可以阻斷E2引起的EPCs增值；SP600125在1umol/L、25umol/L、50umol/L、75umol/L、100umol/L吸光值分別為0.6152±0.0406、0.4255±0.0395、0.3882±0.0185、0.4090±0.0761、0.4168±0.1012，與E2組相比SP600125在25umol/L、50umol/L、75umol/L、100umol/L
