木犀草對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血大鼠的腦保護(hù)作用及機(jī)制研究

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1、河北醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文木犀草對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血大鼠的腦保護(hù)作用及機(jī)制研究姓名：?jiǎn)虝?huì)敏申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：張祥建201204中文摘要木犀草素對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血大鼠的腦保護(hù)作用及機(jī)制研究摘要腦血管病是我國(guó)居民死亡的第一原因和成人殘疾的第一原因，以缺血性腦血管病最為常見(jiàn)，具有發(fā)病率高、病死率高、致殘率高、復(fù)發(fā)率高、恢復(fù)緩慢的特點(diǎn)。缺血后繼發(fā)性腦損傷是患者的病情加重和影響預(yù)后的重要原因。近年來(lái)，腦缺血后腦損傷的病理生理機(jī)制研究已取得了重大進(jìn)步，然而，臨床治療效果卻非常有限。腦梗死后的繼發(fā)性腦損傷常導(dǎo)致

2、病情加重，主要包括氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、凋亡、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、細(xì)胞毒性作用、活性氧及自由基等，這幾種因素之間相互作用、相互影響，構(gòu)成復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，形成惡性循環(huán)，造成一系列病理級(jí)聯(lián)反應(yīng)，其中過(guò)度炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激和凋亡存在于腦梗死后壞死和缺血區(qū)域，成為導(dǎo)致繼發(fā)損傷的主要原因。因此，抗氧化應(yīng)激、減輕炎癥損傷、抑制凋亡成為治療腦梗死的主要途徑之一。木犀草素(Luteolin)是一種天然黃酮類化合物，分子式為：C15HI006，存在于多種植物中，因最初是從木犀草科(Resedaceae)木犀草屬草本植物木犀草(Rese

3、daodorataL)的葉、莖、枝中分離出而得名，具有多種藥理活性，如抗炎、抗氧化、抑制凋亡、抗過(guò)敏、抗腫瘤、抗菌、抗病毒、增強(qiáng)免疫功能等多種生物學(xué)作用，其毒副作用低，具有良好的臨床應(yīng)用潛力。本研究選用雄性Sprague．Dawley大鼠，應(yīng)用改良Longa線栓法建立大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞(middlecerebralarteryocclusion，MCAO)模型。在大鼠永久性大腦中動(dòng)脈阻塞所致的腦缺血模型上觀察腦缺血后TLR4，TLR5，P38MAPK，ERKl／2，claudin．5，Bcl．2和Bax的

4、表達(dá)，大腦皮層梗塞灶超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase，SOD)與過(guò)氧化氫酶(Catalase，CAT)活性及丙二醛(Malondiadehyde，MDA)的含量。確定缺血后與炎癥反應(yīng)、氧化損傷及凋亡的關(guān)系，并選用黃酮類化合物木犀草素進(jìn)行干預(yù)，評(píng)價(jià)干預(yù)前后梗死體積、腦含水量、神經(jīng)功能缺損評(píng)分，以及木犀草素對(duì)TLR4，TLR5，P38MAPK，ERKl／2，claudin．5，Bcl-2和Bax的表達(dá)信號(hào)通路的影響，研究木犀草素對(duì)缺血損傷后的腦保護(hù)作中文摘要用機(jī)制進(jìn)行初步探討，并檢測(cè)木犀草素

5、對(duì)氧化應(yīng)激標(biāo)志物SOD，CAT活性和MDA含量的影響。本研究分三部分，現(xiàn)將各部分內(nèi)容概述如下。第一部分木犀草素對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血大鼠的抗氧化作用及機(jī)制研究目的：觀察實(shí)驗(yàn)性大鼠腦缺血損傷后不同時(shí)間點(diǎn)梗死體積、腦含水量、神經(jīng)功能缺損評(píng)分，claudin．5的表達(dá)變化以及SOD，CAT的活性和MDA的含量。研究木犀草素對(duì)腦缺血大鼠的腦保護(hù)作用。探討木犀草素抗氧化作用的相關(guān)機(jī)制。方法：選用成年健康雄性Sprague．Dawley大鼠為研究對(duì)象，應(yīng)用改良Longa線栓法制備大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈梗塞模型(MCAO)。實(shí)驗(yàn)l：觀

6、察木犀草素的神經(jīng)保護(hù)作用，梗塞后24h和72h分別觀察神經(jīng)功能缺損評(píng)分，腦含水量，梗塞體積。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為6組，假手術(shù)組(Sham)，假手術(shù)后腹腔注射等量生理鹽水+I％DMSO；手術(shù)組(MCAO)，缺血術(shù)后腹腔注射等量生理鹽水：溶劑對(duì)照組(MC+DM)，缺血術(shù)后腹腔注射等量生理鹽水+I％DMSO；木犀草素小劑量組(Luteolin．L)，缺血術(shù)后腹腔注射木犀草素5mg／kg；木犀草素中劑量組(Luteolin．M)，缺血術(shù)后腹腔注射木犀草素10mg／kg；木犀草素大劑量組(Luteolin．H)，缺血術(shù)后腹

7、腔注射木犀草素25mg／kg。實(shí)驗(yàn)2：觀察木犀草素的抗氧化功能。檢測(cè)腦組織中超氧化物歧化酶(SOD)，過(guò)氧化氫酶(CAT)的活性，丙二醛(MDA)含量的變化情況。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為5組，假手術(shù)組(Sham)，手術(shù)組(MCAO)，溶劑對(duì)照組(MC+DM)，木犀草素中劑量組(Luteolin．M)，木犀草素大劑量組(Luteolin．H)。實(shí)驗(yàn)3：觀察腦缺血后木犀草素對(duì)血腦屏障的影響。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為5組，假手術(shù)組(Sham)，手術(shù)組(MCAO)，溶劑對(duì)照組(MC+DM)，木犀草素中劑量組(Luteolin．M)，

8、木犀草素大劑量組(Luteolin．H)。各組取材前進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，干濕重法測(cè)定腦組織含水量，TTC染色評(píng)價(jià)腦梗死體積，分別用RT-qPCR的方法和Westernblot的方法檢測(cè)缺血腦組織claudin．5mRNA和蛋白水平的變化。結(jié)果：lSham組無(wú)神經(jīng)功能缺損，神經(jīng)功能缺損評(píng)分為0分；MCAO組和MC+DM組在24h和72h神經(jīng)功能缺損評(píng)分均較嚴(yán)重，Luteolin．L組在中文摘要24h和7