腦心康片對(duì)大鼠腦缺血保護(hù)機(jī)制的研究

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1、腦心康片對(duì)大鼠腦缺血保護(hù)機(jī)制的研究作者：李卉，蘇云明，孟妍，李環(huán)，張學(xué)會(huì)【摘要】目的觀察腦心康片對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，進(jìn)一步探討其作用機(jī)制。方法采用大鼠大腦中動(dòng)脈線栓法制備不完全腦缺血模型，觀察腦心康片給藥前后大腦中動(dòng)脈阻塞(MCAO)大鼠神經(jīng)功能缺損導(dǎo)致的行為學(xué)變化；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)腦心康片對(duì)MCAO模型大鼠急性腦損傷細(xì)胞凋亡的影響；免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腦心康片對(duì)腦缺血后24，48，7h腦組織COX2蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果大鼠腦缺血再灌注損傷后24，48，7h腦組織中COX2陽(yáng)性細(xì)胞平均灰度值及神經(jīng)元細(xì)胞

2、凋亡率模型組與假手術(shù)組相比，差異有顯著意義；給藥后腦心康高、中、低劑量組與銀杏葉片組相比，差異有顯著意義；給藥后腦心康高、中、低劑量組與尼莫地平組相比，差異有顯著意義。結(jié)論腦心康片對(duì)腦缺血具有保護(hù)作用，并遵循一定的時(shí)效關(guān)系和量效關(guān)系，其機(jī)制可能與降低缺血腦組織神經(jīng)元的凋亡率，抑制COX2蛋白的表達(dá)有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】腦心康片；腦缺血；再灌注損傷；細(xì)胞凋亡；COX2腦血管疾病是神經(jīng)系統(tǒng)的常見病、多發(fā)病，是目前引起人類死亡的三大疾病之一。缺血性腦卒中是多種原因引起的一種臨床病理狀態(tài),其腦組織損害是產(chǎn)生臨床征象的病理基礎(chǔ)。

3、在本病的預(yù)防、治療和康復(fù)方面，中醫(yī)藥具有較為顯著的療效和優(yōu)勢(shì)［1］。臨床應(yīng)用腦心康片治療腦缺血，取得滿意療效。本文旨在通過(guò)對(duì)大鼠腦神經(jīng)損傷的行為學(xué)改變、細(xì)胞凋亡率和凋亡相關(guān)基因COX2蛋白表達(dá)的觀察，探討腦心康片對(duì)腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)作用及其作用機(jī)制?，F(xiàn)報(bào)道如下。1材料動(dòng)物Wistar大鼠，雄性，體質(zhì)量g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)：黑動(dòng)字P00101006。大鼠自由進(jìn)食、飲水，同等條件下飼養(yǎng)，手術(shù)前1h禁食，不禁水。藥品與試劑腦心康片由蝙蝠葛酚性堿50%、水蛭素50%組成，黑龍江中醫(yī)藥

4、大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心制備。尼莫地平片，天津中央藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。銀杏葉片，唐山榮大藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。COX2抗體稀釋度：1:100，SantaCruz公司。HRP標(biāo)記的鏈霉卵白素-親和素SP試劑盒、S/P兩步法檢測(cè)試劑盒、PV6001二步法檢測(cè)試劑盒、兔抗山羊IgG/HRP、山羊抗鼠IgG/HRP，DAB顯色試劑盒，均由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。方法.1分組及給藥方法Wistar大鼠雄性70只，體質(zhì)量g，按照體質(zhì)量隨機(jī)分為7組，每組10只。即腦心康片高劑量組、腦心康片中劑量組、腦心康片低劑量組、尼莫地平組、銀杏葉片

5、組、模型對(duì)照組和假手術(shù)組。各組均連續(xù)灌胃給藥d，末次給藥30min后手術(shù)。.2大鼠腦缺血再灌注模型制備采用大鼠大腦中動(dòng)脈線栓法制備不完全腦缺血模型，末次給藥30min后，20%烏拉坦麻醉，分離并結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈及迷走神經(jīng)4min，然后松開再灌注h。假手術(shù)組只暴露血管不結(jié)扎，其余組均按照上述過(guò)程操作。.3實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的檢測(cè)方法在造模手術(shù)完成3～h，待大鼠蘇醒后，能夠完全自主活動(dòng)時(shí)，進(jìn)行第1次神經(jīng)功能評(píng)分；分別于末次給藥后24，48，7h進(jìn)行第2次神經(jīng)功能評(píng)分。行為學(xué)評(píng)分后處死動(dòng)物，迅速取出大腦置于冰盤上。將大腦分成兩半，取

6、左側(cè)大腦皮層腦組織g制成單細(xì)胞懸液，檢測(cè)大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡率。取右側(cè)大腦制成1%的腦組織勻漿，采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)大鼠腦組織COX2蛋白表達(dá)。.4統(tǒng)計(jì)方法所有數(shù)據(jù)以±s表示，組間比較用t檢驗(yàn)?！?結(jié)果.1腦心康片給藥前后各組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分情況結(jié)果見表1。表1各組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分的基本情況由表1可見，模型組與假手術(shù)組相比，差異有顯著性意義，說(shuō)明造模是成功的。經(jīng)藥物治療后，藥物治療各組的大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分積分治療前與治療后比較，及藥物治療后的神經(jīng)功能缺損評(píng)分積分與模型組的比較，均具有極顯著差異，P＜，說(shuō)明各

7、治療藥物對(duì)腦缺血均具有顯著的治療作用，能明顯改善神經(jīng)功能缺損，使大鼠因腦缺血導(dǎo)致的行為障礙得到部分改善，但還未達(dá)到完全恢復(fù)的程度，即與假手術(shù)組比較，P＜。且7h腦心康片治療組的療效優(yōu)于2h治療組，差異顯著，P＜，說(shuō)明腦心康片對(duì)腦缺血的保護(hù)作用存在著一定的時(shí)效關(guān)系。.2腦心康片對(duì)細(xì)胞凋亡的影響結(jié)果見表2。表2腦心康片對(duì)MCAO大鼠腦組織細(xì)胞凋亡的影響　　由表2可見模型組與假手術(shù)組比較有顯著性差異，P＜，說(shuō)明造模是成功的。所有藥物治療組與假手術(shù)組比較，均有顯著性差異，P＜，與模型組比較差異亦顯著，P＜或P＜。假手術(shù)組腦組

8、織的神經(jīng)細(xì)胞可測(cè)得凋亡峰，即細(xì)胞凋亡率不為0，說(shuō)明正常的腦組織亦有少量的凋亡現(xiàn)象發(fā)生?！　?shí)驗(yàn)結(jié)果表明，腦心康片具有明顯的抗腦缺血作用，對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡具有明顯的抑制作用，隨劑量增加，此作用明顯增強(qiáng)。腦心康片高劑量抗腦缺血的作用要優(yōu)于銀杏葉片，與尼莫地平作用相當(dāng)，中劑量弱于尼莫地平，但與銀杏葉片作用相當(dāng)，低劑量弱于尼莫地平和銀杏葉片。.3腦心康