腦心康片對大鼠腦缺血保護機制的研究論文

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1、腦心康片對大鼠腦缺血保護機制的研究論文李卉，蘇云明，孟妍，李環(huán)，張學(xué)會【摘要】目的觀察腦心康片對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用，進一步探討其作用機制。方法采用大鼠大腦中動脈線栓法制備不完全腦缺血模型，觀察腦心康片給藥前后大腦中動脈阻塞(MCAO)大鼠神經(jīng)功能缺損導(dǎo)致的行為學(xué)變化；流式細胞術(shù)檢測腦心康片對MCAO模型大鼠急性腦損傷細胞凋亡的影響；免疫組織化學(xué)法檢測腦心康片對腦缺血后24，48.freelg/kg）、腦心康片中劑量組（50mg/kg）、腦心康片低劑量組（25mg/kg）、尼莫地平組（21.6mg/kg）、銀杏葉片組（135mg/kg）、模型對照組和假手術(shù)組（分別給

2、等體積生理鹽水）。各組均連續(xù)灌胃給藥7d，末次給藥30min后手術(shù)。2.2大鼠腦缺血再灌注模型制備采用大鼠大腦中動脈線栓法制備不完全腦缺血模型，末次給藥30min后，20%烏拉坦（1g/kg，ip）麻醉，分離并結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈及迷走神經(jīng)45min，然后松開再灌注2h。假手術(shù)組只暴露血管不結(jié)扎，其余組均按照上述過程操作。2.3實驗指標的檢測方法在造模手術(shù)完成3～5h，待大鼠蘇醒后，能夠完全自主活動時，進行第1次神經(jīng)功能評分；分別于末次給藥后24，48，72h進行第2次神經(jīng)功能評分。行為學(xué)評分后處死動物，迅速取出大腦置于冰盤上。將大腦分成兩半，取左側(cè)大腦皮層腦組織2g制成單細胞懸

3、液，檢測大鼠神經(jīng)細胞凋亡率。取右側(cè)大腦制成1%的腦組織勻漿，采用免疫組織化學(xué)法檢測大鼠腦組織COX2蛋白表達。2.4統(tǒng)計方法所有數(shù)據(jù)以±s表示，組間比較用t檢驗。3結(jié)果3.1腦心康片給藥前后各組大鼠神經(jīng)功能缺損評分情況結(jié)果見表1。表1各組大鼠神經(jīng)功能缺損評分的基本情況（略）由表1可見，模型組與假手術(shù)組相比，差異有顯著性意義（P0.01），說明造模是成功的。經(jīng)藥物治療后，藥物治療各組的大鼠神經(jīng)功能缺損評分積分治療前與治療后比較，及藥物治療后的神經(jīng)功能缺損評分積分與模型組的比較，均具有極顯著差異，P＜0.01，說明各治療藥物對腦缺血均具有顯著的治療作用，能明顯改善神經(jīng)功能缺損，

4、使大鼠因腦缺血導(dǎo)致的行為障礙得到部分改善，但還未達到完全恢復(fù)的程度，即與假手術(shù)組比較，P＜0.01。且72h腦心康片治療組的療效優(yōu)于24h治療組（高劑量），差異顯著，P＜0.05，說明腦心康片對腦缺血的保護作用存在著一定的時效關(guān)系。3.2腦心康片對細胞凋亡的影響結(jié)果見表2。表2腦心康片對MCAO大鼠腦組織細胞凋亡的影響（略）由表2可見模型組與假手術(shù)組比較有顯著性差異，P＜0.01，說明造模是成功的。所有藥物治療組與假手術(shù)組比較，均有顯著性差異，P＜0.01，與模型組比較差異亦顯著，P＜0.01或P＜0.05。假手術(shù)組腦組織的神經(jīng)細胞可測得凋亡峰，即細胞凋亡率不為0，說明正常的

5、腦組織亦有少量的凋亡現(xiàn)象發(fā)生。實驗結(jié)果表明，腦心康片具有明顯的抗腦缺血作用，對神經(jīng)元細胞凋亡具有明顯的抑制作用，隨劑量增加，此作用明顯增強。腦心康片高劑量抗腦缺血的作用要優(yōu)于銀杏葉片，與尼莫地平作用相當，中劑量弱于尼莫地平，但與銀杏葉片作用相當，低劑量弱于尼莫地平和銀杏葉片。3.3腦心康片對MCAO大鼠腦組織COX2表達的影響結(jié)果見表3。表3腦心康片對MCAO大鼠腦組織COX2表達的影響（略）由表3可見，經(jīng)藥物治療后，各組的大鼠腦組織雖可見COX2陽性細胞表達，但與模型對照組比較，均具有極顯著差異，P＜0.01，說明各治療藥物對腦缺血均具有顯著的治療作用，能明顯抑制CO

6、X2表達，且腦心康片同一時間點的高、低劑量組比較差異顯著，P＜0.01；72h腦心康片治療組的療效優(yōu)于24h腦心康片治療組（高劑量），差異顯著，P＜0.05，說明腦心康片對腦缺血的保護作用存在著一定的量效關(guān)系和時效關(guān)系。實驗結(jié)果表明，在缺血早期，腦心康片具有明顯的抗腦缺血、抑制COX2表達的作用，并存在一定的量效關(guān)系及時效關(guān)系。4討論細胞凋亡是細胞接受導(dǎo)致凋亡的“信號”時，細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)被激活，啟動內(nèi)部自身基因調(diào)控機制，引起細胞自殺性死亡［2］。近年來日益增多的證據(jù)表明，神經(jīng)元凋亡參與缺血性細胞損傷，并且是缺血引起選擇性神經(jīng)元丟失的一種重要形式。腦缺血后，細胞因Glu受體

7、過量激活、鈣超載、炎癥變化、OFR、線粒體和DNA損傷而表現(xiàn)出壞死或凋亡兩種死亡形式。在缺血中心區(qū)主要以壞死為主，而在缺血半暗帶以凋亡為主；輕度缺血主要引起細胞凋亡，嚴重缺血主要引起細胞壞死。局灶性腦缺血發(fā)生后神經(jīng)元的死亡有兩種不同的方式：細胞壞死和細胞凋亡，并且兩種方式可以并存［3］。環(huán)氧合酶（COX）是催化花生四烯酸合成前列腺素和血栓素的限速酶，能引起炎癥反應(yīng)并導(dǎo)炎癥細胞毒性。其活性在控制前列腺素類物質(zhì)的合成過程中有著重要作用。越來越多的證據(jù)表明COX參與了缺血性腦損傷，是核因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的靶目標之一