酪氨酸磷酸酶shp2在il-6誘導(dǎo)的gc源性b-nhl細(xì)胞重分化中的研究

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1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文酪氨酸磷酸酶SHP2在IL--6誘導(dǎo)的GC源性B--NHL細(xì)胞重分化中的研究姓名：江鑫申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：周韌20120526浙江人學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要酪氨酸磷酸酶Shp2在IL．6誘導(dǎo)的GC源性B．NHL細(xì)胞重分化中的研究浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)與病理生理學(xué)博士研究生江鑫導(dǎo)師周韌教授中文摘要目的和意義正常B細(xì)胞分化發(fā)育分子途徑中存在著天然的風(fēng)險(xiǎn)?？乖牟粩啻碳?、sHM以及CsR都會(huì)導(dǎo)致B細(xì)胞DNA處于經(jīng)常性斷裂、轉(zhuǎn)位和修復(fù)過(guò)程中，使得B細(xì)胞基因組不穩(wěn)定，長(zhǎng)期積累將引起B(yǎng)細(xì)

2、胞的發(fā)育異常和惡性轉(zhuǎn)化。目前認(rèn)為這是B淋巴細(xì)胞源性淋巴瘤產(chǎn)生的重要分子機(jī)制之一。B淋巴細(xì)胞可因其微環(huán)境的改變而重新定向分化而改變命運(yùn)，我們稱之為“B淋巴細(xì)胞的重分化”，目前學(xué)術(shù)界已逐步形成共識(shí)。淋巴組織的生發(fā)中心(Ge珊inalCenter，GC)是B細(xì)胞分化發(fā)育的重要微環(huán)境之一，也是導(dǎo)致B細(xì)胞基因組不穩(wěn)定的諸多分子事件(如SHM和CSR)集中地，是影響B(tài)淋巴細(xì)胞的重分化的關(guān)鍵場(chǎng)所。近年來(lái)的文獻(xiàn)揭示，Bur惱tt淋巴瘤(Bur鼬ttLymphoma，BL)、濾泡性淋巴瘤(FollicuIarLymphoma，li．L)、大

3、部分彌漫性大B細(xì)胞性淋巴瘤(Dif

4、fuseLargeBce¨Lymphoma，DLBcL)和部分霍奇金氏淋巴瘤在形成過(guò)程中都與Gc有著密不可分的聯(lián)系，它們的分子發(fā)生模式在分子生物學(xué)和遺傳學(xué)上都存在著淵III浙江大學(xué)博上學(xué)位論文中文摘要源關(guān)系。已發(fā)現(xiàn)的證據(jù)有：它們的免疫球蛋白重鏈基因(19H)上都經(jīng)歷了sHM和CSR；它們或多或少都涉及IgIl相關(guān)的染色體轉(zhuǎn)位；它們免疫表型譜系具有共性的和相互重疊性，有的甚至可以相互轉(zhuǎn)化。鑒于上述類型的淋巴瘤分子機(jī)制與Gc有著密不可分的淵源關(guān)系，由此我們提出GC源性淋巴瘤(Gc．de肅ed

5、坶mphomas)的概念并對(duì)其發(fā)育分化的分子機(jī)制進(jìn)行深入研究。GC源性B細(xì)胞淋巴瘤(GC．derivedBceuLymphoma)是最易發(fā)生染色體易位的惡性淋巴瘤。GC源性B細(xì)胞淋巴瘤在其發(fā)生的分子模式上具有遺傳學(xué)上的淵源關(guān)系，因此具有相似分子特征。而且各類GC源性B細(xì)胞淋巴瘤具有共同的免疫表型譜系，有的甚至可以相互轉(zhuǎn)化。因此本研究作者認(rèn)為對(duì)GC源性B細(xì)胞淋巴瘤發(fā)育分化的分子機(jī)制進(jìn)行深入研究具有重要的科學(xué)意義。已有研究證明微環(huán)境中細(xì)胞因子IL-6水平的變化是調(diào)節(jié)B淋巴細(xì)胞的重分化的關(guān)鍵因素。正常情況下，IL．6通過(guò)調(diào)節(jié)胞內(nèi)

6、sHP2的活性來(lái)決定Gc來(lái)源B淋巴細(xì)胞的發(fā)育。sHP2是第一個(gè)確定的具有酪氨酸磷酸酶活性的原癌基因，其在諾南綜合癥和多發(fā)性黑痣綜合癥及幼年型白血病中的調(diào)控機(jī)制較明確。除了作為一種原癌基因，sHP2還在多條促癌信號(hào)通路當(dāng)中起到重要作用。已知SHP2是RAS．ERK、P13K-AKT和STATl、S1Ar3等信號(hào)通路上游信號(hào)分子。sHP2還參與了B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)與發(fā)育。已有研究證實(shí)SHP2作為IL．6信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白，是B細(xì)胞分化的重要調(diào)節(jié)分叉點(diǎn)。當(dāng)IL一6刺激時(shí)，其信號(hào)通路中關(guān)鍵蛋白sHP2的活化與否決定了B細(xì)胞

7、是會(huì)生長(zhǎng)停止，走向凋亡還是會(huì)促進(jìn)B細(xì)胞生長(zhǎng)存活兩種截然不同的命運(yùn)．因此，有必要更加深入研究IL-6信號(hào)通路中的sHP2蛋白在B淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)分化中所起到的作用。這一課題研究一方面將有助于人們深入了解IL-6促進(jìn)GC源性B細(xì)胞惡性腫瘤生長(zhǎng)發(fā)育的機(jī)制，并為Gc源性B細(xì)胞淋巴瘤的治療提供新的作用靶點(diǎn)；另一方面將促進(jìn)對(duì)IL．6在B淋巴細(xì)胞胞漿信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的地位和作用的深入了lV浙江人學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要解。本課題的研究中，首先，我們從具有代表意義的GC源性B．NHL細(xì)胞株入手，主要進(jìn)行以下兩個(gè)方面的研究：1)研究SHP2在IL．

8、6促進(jìn)GC源性B細(xì)胞淋巴瘤生長(zhǎng)以及調(diào)節(jié)GC標(biāo)志蛋白表達(dá)中的作用；2)探索SHP2在lL．6誘導(dǎo)的GC源性B細(xì)胞淋巴瘤的重分化中的作用。本研究旨在“B淋巴細(xì)胞的重分化”視野下，深入研究GC源性B．NHL轉(zhuǎn)化分子機(jī)制，這有助于闡明IL．6屆HP2途徑在B細(xì)胞重分化中作用和信號(hào)通路調(diào)節(jié)關(guān)鍵靶點(diǎn)，進(jìn)而探討不同GC源性的B．NHL在相應(yīng)的微環(huán)境改變下產(chǎn)生的不同分子調(diào)控模式以及它們的分子節(jié)點(diǎn)，并在此基礎(chǔ)上闡明GC源性的B．NHL的獨(dú)特的分子發(fā)病機(jī)制，為GC源性B．NHL臨床分子診斷和治療相關(guān)分子靶標(biāo)提供科學(xué)依據(jù)。，●‘．’方法一、sH

9、P2表達(dá)沉默對(duì)GC來(lái)源B．NHL細(xì)胞生物學(xué)特性的影響①利用SHP2sil訊A抑制GC來(lái)源B．NHL細(xì)胞中內(nèi)源性SHP2的表達(dá)，nal“meqRT-PCR和Westem瑚otting檢測(cè)轉(zhuǎn)染的SHP2siI礬A對(duì)各組細(xì)胞內(nèi)源性SHP2表達(dá)水平的影響；此外，用IL石分別刺激SHP2干擾組和陰性對(duì)照組GcB—