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《豬傳染性胃腸炎病毒膠體金免疫層析試紙條的研制》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、前言1前言豬傳染性胃腸炎病毒(Transmissiblegastroenteritisvirusofswine，TGEV)屬冠狀病毒科冠狀病毒屬成員，主要引起豬的傳染性胃腸炎(Transmissiblegastroenteritis，TGE)。該病是一種以嚴(yán)重腹瀉、嘔吐和脫水為臨床特征的高度接觸性傳染病(SaifLJ,etal。1992)，屬國際獸疫局(OIE)法典中B類疫病。各種年齡及品種的豬對本病均易感，其中，2周齡以下的仔豬病死率可達(dá)100％，5周齡以上豬的死亡率很低，成年豬幾乎沒有死亡。該病呈世界性分布(PatonD，etal，1
2、997；EnjuanesL，etal，1995)，TGE首次由Doyle和Hutchings(1946)在美國報道，日本(1956)和英國(1957)先后報道該病，這之后歐洲、北美、亞洲等多個國家相繼報道發(fā)生了TGE，現(xiàn)在除阿拉斯加、北歐各國之外，在北半球，特別是在北緯30度以北的溫帶至寒帶地區(qū)，均有本病的分布(SirinarumitrLeta1．，1998)。我國1956年在廣東省首次發(fā)生了此病，此后全國多數(shù)省份也先后有本病發(fā)生的報道，近年來，TGE在我國部分地區(qū)時有發(fā)生和流行，給養(yǎng)豬業(yè)造成極大危害(EnjuanesL。eta1．，19
3、95；何孔旺等，2001)。對TGE常規(guī)診斷，主要依據(jù)于臨床疾病表現(xiàn)，實驗室電鏡和免疫電鏡檢查。在臨床診斷中該病極易與流行性腹瀉、輪狀病毒感染等腸道傳染病相混淆，電鏡形態(tài)及特征對本病確診具有特殊意義。但因?qū)υ\斷的特殊設(shè)備要求，限制了其普遍的應(yīng)用價值。因此，實踐中迫切需要實用性強(qiáng)、敏感性高、快速簡便的對腸道病毒性疾病具有診斷和鑒別診斷價值的新試劑與新方法。本文就與TGEV診斷具有價值的病原學(xué)特征、病原學(xué)診斷等有關(guān)研究進(jìn)展作一綜述。1．1TGEV的病原學(xué)特性及研究進(jìn)展1．1．1TGEV的形態(tài)學(xué)特性TGEV最早于1964年分離(SanchezC
4、M,etal，1992)，屬冠狀病毒科，冠狀病毒屬成員(TajimaM,etal，1970；VetterlieinWetal，1971)，經(jīng)濾過試驗、超速離心和電鏡觀察，病毒粒子的直徑為90．200nm，呈多形性(JonesLeta1．，1997)，大多為圓形、橢圓形。病毒粒子囊膜由雙層脂質(zhì)組成，在脂質(zhì)雙層中穿插有2種糖蛋白，分別是M蛋白(Membraneprotein，M)和S蛋白(Spikeprotein,S)圖l。S糖蛋白為囊膜上覆有的花瓣狀纖突，纖突長18---24nm，以極小的柄S：纖突蛋白M：Nexo-Cedo型膜蛋白M．：N
5、exo-Cexo型膜蛋白N：核蛋白E：sM蛋白MEM：類脂膜圖lTGEV病毒粒子結(jié)構(gòu)模式圖Fig．1StructureoftheTGEV(Gonz’alez,eta1．，2003)東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)碩士學(xué)位論文連接在囊膜的表面，其末端呈球狀，直徑約10nm。。因制片時容易使纖突脫落，所以經(jīng)常只看到囊膜的邊界，或者只在囊膜的某些部位有這種花瓣狀纖突，可見到一個電子透明的中心或沒有特征的核心(Lowings，eta1．，1997；Wesley,eta1．，1990；王繼科等，1991)。病毒粒子內(nèi)部為RNA和N蛋白(Nucleocapsidpr
6、otein，N)組成的核蛋白核芯，呈螺旋式結(jié)構(gòu)，直徑9～16nm。1．1．2TGEV的培養(yǎng)特性可用于TGEV培養(yǎng)的細(xì)胞有豬甲狀腺細(xì)胞(PT)、豬睪丸細(xì)胞(ST)、豬腎細(xì)胞(PK．15，IBRS．2)、豬唾液腺細(xì)胞(PSG)。IBRS．2和ST細(xì)胞是實驗室常用細(xì)胞(冉智光等，1997：蘇萬國等，2000)，初次傳代分離時，病毒產(chǎn)生的細(xì)胞病變可能是短暫的或輕微的。已適應(yīng)了體外培養(yǎng)細(xì)胞的TGEV可在傳代細(xì)胞上很好地增殖，出現(xiàn)明顯的細(xì)胞病變，如細(xì)胞腫脹、胞漿內(nèi)形成空泡，細(xì)胞變圓，皺縮、有顆粒，有的破碎崩解，部分細(xì)胞從單層上脫落，形成網(wǎng)眼狀，但是即
7、使延長培養(yǎng)時間，也不會使整個細(xì)胞單層破壞。某些毒株，即使盲傳數(shù)代也不產(chǎn)生細(xì)胞病變(SirinarumitrT．1998)。病毒的成熟發(fā)生于細(xì)胞漿中，通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)出芽，常在細(xì)胞漿的空泡見到病毒粒子。1．1．3TGEV的理化特性TGEV不耐熱，加熱56℃45分鐘或65℃10分鐘即全部滅活，1MMgCl2可增強(qiáng)熱滅活作用。病毒在冷凍狀態(tài)下很穩(wěn)定。據(jù)報道，來自患豬腸組織中的病毒于．20"C存放6"-18個月未見滴度下降(Young，etal，1955；HaeltermanandHutchings，1956)。相反，來自患豬腸組織中的病毒，在21℃干
8、燥、腐敗狀況下，則很不穩(wěn)定，3天后接種豬4頭，只有兩頭發(fā)??；10天后接種，未檢測到病毒。與所有其它病毒一樣，TGEV對熱的耐受力較弱，而對低溫的耐受力強(qiáng)。置于37℃，每24h病毒滴度下降一個l
